Metodi sierologici per la diagnosi di laboratorio della sifilide. Diagnostica sierologica - metodi di analisi delle infezioni Test sierologici

L'analisi per la sifilide è uno dei test di laboratorio più comuni. I test per la sifilide sono ampiamente utilizzati negli esami preventivi. La microscopia rivela l'agente eziologico della sifilide -. Con l'aiuto delle reazioni sierologiche, viene confermata la diagnosi di sifilide, viene stabilita la diagnosi di sifilide latente, viene monitorata l'efficacia del trattamento e viene determinata la cura dei pazienti.

La diagnosi della sifilide è stabilita sulla base di dati clinici, il rilevamento degli agenti causali della sifilide nei campioni di materiale e la conferma della diagnosi mediante metodi di ricerca sierologica. Le manifestazioni della sifilide sono numerose e varie, motivo per cui la malattia viene rilevata da medici di diverse specialità. La diagnosi differenziale della sifilide primaria viene effettuata con una serie di malattie.

Riso. 1. Nella foto, la manifestazione principale della sifilide è un duro colpo.

Anticorpi contro il treponema pallido e diagnosi sierologica

Quando infettati dalla sifilide, gli anticorpi si formano nel corpo del paziente. La diagnostica sierologica aiuta il medico a studiare la dinamica della formazione di anticorpi nel corpo di un paziente con sifilide nelle fasi iniziali della malattia, durante il periodo di trattamento e dopo la sua fine, per risolvere il problema di una ricaduta della malattia in un paziente o reinfezione (reinfezione), per diagnosticare la sifilide in condizioni mediche di massa.

Anticorpi anti treponema pallidum IgM

Gli anticorpi IgM vengono prodotti per primi dopo l'infezione. Iniziano a essere rilevati utilizzando reazioni sierologiche dalla seconda settimana dopo l'infezione. A 6 - 9 settimane di malattia, il loro numero diventa massimo. Se il paziente non è stato trattato, gli anticorpi scompaiono dopo sei mesi. Gli anticorpi IgM scompaiono dopo 1 o 2 mesi. dopo, dopo 3 - 6 mesi. - dopo il trattamento della sifilide tardiva. Se la loro crescita viene registrata, questo serve o parla di reinfezione. Le molecole di IgM sono grandi e non attraversano la placenta fino al feto.

Anticorpi contro il treponema pallidum IgG

Anticorpi Le immunoglobuline IgG compaiono alla fine del primo mese (alla 4a settimana) dal momento dell'infezione. Il loro titolo è superiore a quello delle IgM. Le IgG persistono a lungo dopo la cura.

Anticorpi non specifici

Ci sono molte reazioni sierologiche. Ciò è dovuto alla pluralità antigenica dei treponemi pallidi. Nel siero del sangue di una persona malata in diversi stadi della sifilide, oltre a quelli specifici, si formano alcuni anticorpi non specifici: agglutinine, legame del complemento, immobilisine, anticorpi che causano fluorescenza immunitaria, precipitine, ecc. Reazioni sierologiche per identificare anticorpi non specifici hanno una specificità relativa, quindi, al fine di evitare errori diagnostici, è necessario utilizzare non uno, ma un complesso di reazioni sierologiche (CSR).

Test falsi positivi per la sifilide

Una caratteristica distintiva dei test non treponemici è la ricezione di reazioni false positive. Gli anticorpi-reagine, prodotti nel sangue umano contro l'antigene cardiolipina, sono registrati non solo nella sifilide, ma anche in altre malattie: collagenosi, epatite, malattie renali, tireotossicosi, cancro, malattie infettive (lebbra, tubercolosi, brucellosi, malaria, , scarlattina), durante la gravidanza e le mestruazioni, quando si mangiano cibi grassi e alcol. Si noti che il numero di reazioni false positive aumenta con l'età.

Riso. 2. La foto mostra la sifilide primaria nelle donne.

Diagnosi di laboratorio della sifilide mediante test sierologici

I test sierologici per la sifilide sono classificati come treponemici e non treponemici.

1. Test non treponemici

L'antigene cardiolipina viene utilizzato come antigene in questo gruppo di test. Gli antigeni lipidici degli agenti causali della sifilide sono i più numerosi. Costituiscono 1/3 della massa secca della cellula. I test non treponemici rilevano gli anticorpi della reagina prodotti contro l'antigene cardiolipina. Questo gruppo comprende la reazione di fissazione del complemento (RSCcard), la reazione di microprecipitazione (RMP), la determinazione rapida delle reagine plasmatiche (RPR) e altri. consente di utilizzare questi test per monitorare l'efficacia del trattamento. I risultati positivi dei test non treponemici devono essere confermati dai test treponemici. Una caratteristica distintiva dei test non treponemici è la ricezione di reazioni false positive.

2. Test treponemici

I test treponemici utilizzano antigeni di origine treponemica, isolati da una coltura di treponema pallido. Con il loro aiuto, vengono confermati i risultati positivi dei test non treponemici. Il gruppo comprende: RSCtrep - la reazione di legame del complemento, RIF - la reazione di immunofluorescenza e sua modifica, RIT, RIBT - la reazione di immobilizzazione dei treponemi pallidi, RPHA - la reazione di emoagglutinazione passiva, ELISA - saggio immunoassorbente legato all'enzima.

3. Test per la sifilide utilizzando antigeni ricombinanti

Gli antigeni per questo gruppo di test sono ingegnerizzati geneticamente e utilizzati nelle reazioni - RPHA ed ELISA, nelle analisi di immunoblotting (IB) e nell'analisi immunocromatografica.

Riso. 3. Viene utilizzata una serie di test sierologici per diagnosticare la sifilide.

Diagnosi di sifilide mediante test non treponemici

Per rilevare la sifilide, vengono utilizzati test non treponemici o un complesso di test sierologici (CSR). La diagnostica sierologica viene applicata dalla 5a settimana dal momento dell'infezione o da 2-3 settimane dopo la comparsa. Gli anticorpi vengono rilevati in quasi tutti i pazienti con primaria fresca. Le reazioni sierologiche sono positive nel 70 - 80% dei pazienti con, nel 50 - 60% dei casi nei pazienti con sifilide terziaria latente.

I test sierologici che utilizzano test non treponemici possono dare risultati falsi positivi.

Riso. 4. Prelievo di sangue per il test della sifilide.

Reazione di legame del complemento (scheda CSC, CSC con CA, reazione di Wasserman)

La reazione di Wasserman (RW, RV), inventata da A. Wasserman più di 100 anni fa, ha subito oggi molte modifiche, tuttavia, in omaggio alla tradizione, ha mantenuto il suo nome fino ai giorni nostri. La reazione di legame del complemento utilizzando un antigene cardiolipina è intesa non solo per la rilevazione di anticorpi, ma viene eseguita anche in una versione quantitativa - con diverse diluizioni di siero, che consente di utilizzarla per monitorare l'efficacia del trattamento. Bassa sensibilità e specificità, ottenendo risultati falsi positivi sono gli aspetti negativi di questo tipo di studio.

L'essenza della reazione di Wasserman è la seguente: gli antigeni che vengono utilizzati durante la messa in scena della reazione di Wasserman, nel caso della presenza di anticorpi contro gli agenti causali della sifilide nel sangue umano, si legano a loro attraverso un complimento e precipitano. L'intensità della reazione è indicata da un segno (+). La reazione può essere negativa (-) - nessun sedimento, dubbia (poco sedimento o +), leggermente positiva (++), positiva (+++) e nettamente positiva (++++).

Più sensibile è la reazione di Wasserman modificata - la reazione di Kolmer. Con il suo aiuto, gli anticorpi vengono rilevati nei sieri, dove la reazione di Wasserman ha dato un risultato negativo.

In caso di reazioni nettamente positive, viene eseguita una determinazione quantitativa delle reagine, per le quali il siero viene utilizzato in diluizioni da 1:10 a 1: 320, che consente di utilizzare questo tipo di studio per monitorare l'efficacia del trattamento. Ad esempio, una diminuzione del titolo degli anticorpi e la loro successiva sieronegatività (ottenimento di risultati negativi) indica una cura riuscita della malattia.

Riso. 5. Esame del sangue per la sifilide - Reazione di Wasserman.

Microreazione di precipitazione (MPR)

La microreazione delle precipitazioni viene utilizzata per esami di massa di alcuni gruppi della popolazione, per diagnosticare la sifilide e monitorare l'efficacia del trattamento. Per effettuare questo tipo di ricerca è necessaria una piccola quantità del materiale di prova. La microreazione di precipitazione si basa sulla reazione immunologica antigene-anticorpo. In caso di presenza di anticorpi nel siero del soggetto, il complesso antigene-anticorpo precipita con formazione di scaglie. La reazione viene condotta nei pozzetti di una speciale lastra di vetro. È stimato dall'intensità del precipitato e dalla dimensione dei fiocchi in (+) come reazione di Wasserman. Quando si esaminano donne in gravidanza, donatori e per monitorare l'efficacia del trattamento, non viene utilizzato. VDRL e RPR sono tipi di microreazioni.

Riso. 6. Tipo di reazione di precipitazione in una goccia su vetro.

Riso. 7. Esame del sangue per la sifilide - reazione di microprecipitazione.

Riso. 8. Kit per la determinazione rapida delle reagine plasmatiche (test sifilide RPR).

Tutti i test positivi ottenuti durante reazioni sierologiche non specifiche richiedono la conferma da reazioni specifiche - test treponemici.

Diagnosi di sifilide mediante test treponemici

Quando si eseguono test treponemici, vengono utilizzati antigeni di origine treponemica. Il loro lato negativo è l'impossibilità di usarli per controllare l'efficacia del trattamento, ottenendo risultati positivi nella spirochetosi e nella treponematosi non venerea e ottenendo risultati falsi positivi nel cancro, nella lebbra e in alcune patologie endocrine. Test come RPHA, ELISA e RIF rimangono positivi per molti anni dopo la guarigione della sifilide e in alcuni casi per tutta la vita.

RIBT e RIF sono i più specifici di tutti i test sierologici utilizzati per diagnosticare la sifilide. Consentono di distinguere tra reazioni false positive, per identificare forme tardive di sifilide che si verificano con reazioni negative. Con l'aiuto di RIBT, vengono riconosciute reazioni false positive nelle donne in gravidanza, quando è necessario risolvere il problema dell'infezione del bambino.

La reazione di immobilizzazione dei treponemi pallidi (RIBT, RIT)

L'essenza della reazione è che gli anticorpi nel siero del sangue del paziente immobilizzano il treponema pallido. Una reazione negativa viene considerata quando l'immobilizzazione fino al 20% di agenti patogeni, debolmente positiva - 21 - 50%, positiva - 50 - 100%. RIBT a volte dà risultati falsi positivi. Il test è complesso e richiede tempo, tuttavia è indispensabile per la diagnosi differenziale delle forme latenti della malattia e dei risultati falsi positivi delle reazioni sierologiche, anche nelle donne in gravidanza. RIBT dà un risultato positivo al 100% nella sifilide secondaria, precoce e tardiva, nel 94 - 100% dei casi - in altre forme di sifilide.

Reazione di immunofluorescenza (RIF)

L'essenza della reazione è che treponemi pallidi (antigeni), combinati con anticorpi marcati con fluorocromi, emettono un bagliore giallo-verde in un microscopio luminescente. Il risultato viene valutato con un segno (+). Con l'aiuto di RIF, vengono rilevate le immunoglobuline di classe A. La reazione di immunofluorescenza diventa positiva prima della reazione di Wasserman. È sempre positivo nella sifilide secondaria e latente, nel 95 - 100% dei casi è positivo nella sifilide terziaria e congenita. La tecnica per condurre questo tipo di ricerca è più semplice di quella di RIBT, ma è impossibile sostituire RIF con RIBT, poiché questa reazione è inferiore a RIBT in specificità. RIF-10 (modifica RIF) è più sensibile, RIF-200 e RIF-abs sono più specifici.

Riso. 9. Esame del sangue per la sifilide - la reazione di immunofluorescenza (RIF).

Reazione di immunoaderenza Treponema pallidum (PALRT)

L'essenza della reazione è che i treponemi pallidi sensibilizzati dal siero del paziente in presenza di complemento aderiscono alla superficie degli eritrociti. I complessi risultanti precipitano durante la cetrofugazione. La sensibilità e la specificità di questo test sono vicine a RIF e RIBT.

Test immunologico per la sifilide (ELISA)

Con l'aiuto di ELISA, vengono determinate le immunoglobuline di classe M e G. IgM - ELISA può essere utilizzato come test di screening e conferma. La sensibilità dell'ELISA e la sua specificità sono simili a quelle del RIF. Con la sifilide, l'ELISA dà risultati positivi dal terzo mese di infezione e rimane positivo per un periodo piuttosto lungo (a volte per tutta la vita).

Riso. 10. Analizzatore per immunodosaggio.

Reazione di emoagglutinazione passiva (indiretta) (RPHA)

L'RPHA si basa sulla capacità degli eritrociti, sui quali sono adsorbiti gli antigeni del treponema pallidum, di aderire tra loro in presenza del siero del paziente (emoagglutinazione). RPGA viene utilizzato per diagnosticare tutte le forme di sifilide, inclusa quella latente. Quando si utilizza un antigene di alta qualità, questo tipo di reazione sierologica supera tutti gli altri test in termini di specificità e sensibilità.

Riso. 11. L'RPHA viene utilizzato per diagnosticare tutte le forme di sifilide.

Riso. 12. Analisi per la sifilide - la reazione di emoagglutinazione passiva (indiretta) (schema).

Riso. 13. La vista di un ombrello capovolto che occupa l'intero fondo del tubo indica una reazione positiva. Nel caso in cui gli eritrociti si depositino in una colonna ("bottone") al centro del fondo della provetta, parlano di una reazione negativa.

Riso. 14. Test RPGA in condizioni di laboratorio.

Diagnostica microbiologica

Insieme alla diagnostica sierologica, il metodo di rilevamento dei treponemi pallidi (diagnostica microbiologica) svolge un ruolo importante, specialmente durante il periodo della sifilide sieronegativa, quando non ci sono anticorpi nel sangue, ma ci sono già le prime manifestazioni di sifilide primaria fresca (dura cicatrice).

Il materiale biologico per lo studio è lo scarico dalla superficie di ulcere solide (chancre), il contenuto di sifilide pustolosa, papule piangenti ed erosive, punture di linfonodi infetti, liquido cerebrospinale e liquido amniotico, per PCR - sangue.

La migliore tecnica per rilevare gli agenti causali della sifilide è l'esame del materiale biologico nel campo oscuro di un microscopio. Questa tecnica consente di vedere il treponema pallido in uno stato vivente, di studiarne le caratteristiche e i movimenti strutturali, di distinguere i patogeni patogeni dai saprofiti.

Riso. 15. Analisi per la sifilide - microscopia in campo oscuro.

Riso. 16. Quando si studiano gli strisci secchi, viene utilizzata la colorazione secondo Romanovsky-Giemsa. I treponemi pallidi diventano rosa, tutti gli altri tipi di spirochete diventano viola.

La rilevazione del treponema pallido con la microscopia in campo oscuro è un criterio assoluto per la diagnosi finale di sifilide.

Riso. 17. Per rilevare i batteri, viene utilizzata una reazione di immunofluorescenza (RIF): un test treponemico. Uno specifico complesso antigene-anticorpo quando combinato con un siero specifico marcato con un fluorocromo, alla luce di un microscopio luminescente, dà un bagliore verdastro di batteri.

Riso. 18. Gli agenti causali della sifilide sono chiaramente visibili negli strisci preparati secondo il metodo Levaditi (impregnazione d'argento). Treponemi pallidi di colore scuro sullo sfondo della colorazione gialla delle cellule dei tessuti infetti.

Riso. 20. Foto di una colonia di treponema pallido. È difficile ottenere una coltura di batteri. Praticamente non crescono su terreni nutritivi artificiali. Su terreni contenenti siero di cavallo e coniglio, le colonie compaiono dal 3° al 9° giorno.

PCR per la sifilide

Il metodo per eseguire la reazione a catena della polimerasi è efficace e promettente oggi. La PCR per la sifilide consente di ottenere un risultato entro poche ore e nel materiale raccolto per la diagnosi potrebbero essere presenti almeno diversi agenti patogeni.

Riso. 21. La PCR per la sifilide consente di rilevare il DNA oi suoi frammenti di treponema pallido.

La sensibilità di questo metodo di ricerca dipende dalla presenza di treponemi pallidi nel materiale biologico e raggiunge il 98,6%. La specificità di questo test dipende in gran parte dalla scelta corretta di un target per l'amplificazione durante la diagnostica e raggiunge il 100%.

Allo stesso tempo, a causa delle caratteristiche comparative non sufficientemente studiate della sensibilità e della specificità dei metodi diretti per la diagnosi della sifilide e della PCR, questo metodo di esame nella Federazione Russa per la diagnosi della malattia non è ancora consentito.

La PCR per la sifilide può essere eseguita solo in alcuni casi, come metodo aggiuntivo per diagnosticare la sifilide congenita, la neurosifilide, quando è difficile diagnosticare la sifilide utilizzando metodi di ricerca sierologica nei pazienti con HIV.

Riso. 22. Il rilevamento del DNA della tavolozza del treponema mediante PCR indica la presenza di batteri vitali o resti di morti, ma contenenti copie aggiuntive di singole sezioni di DNA cromosomico in grado di formare copie aggiuntive.

Metodo di ricerca sierologica.

Reazioni antigene-anticorpo

Le peculiarità dell'interazione di un anticorpo con un antigene sono alla base delle reazioni diagnostiche nei laboratori.

Reazione in vitro tra antigene e anticorpo comprende:

specifica

fase aspecifica.

V specialefase fisica c'è un rapido legame specifico del centro attivo dell'anticorpo al determinante dell'antigene.

poi arriva fase non specifica - più lento, che si manifesta fenomeni fisici visibili, ad esempio, la formazione di scaglie (fenomeno di agglutinazione) o la precipitazione sotto forma di torbidità. Questa fase richiede la presenza di determinate condizioni (elettroliti, pH ottimale dell'ambiente).

A tal fine, applicare metodi sierologici (dal lat. siero - siero e loghi - dottrina), vale a dire metodi per studiare anticorpi e antigeni utilizzando reazioni antigene-anticorpo, determinate nel siero del sangue e in altri fluidi, nonché nei tessuti corporei.

Quando un microbo viene isolato da un paziente, l'agente patogeno viene identificato studiando le sue proprietà antigeniche utilizzando sieri di diagnostica immunitaria, cioè sieri di sangue di animali iperimmunizzati contenenti anticorpi specifici. Questo è il cosiddetto sierologicoidentificazione microrganismi.

Reazioni di agglutinazione

Reazione di agglutinazione- RA(dal lat. agglutinarenazione - incollaggio) - una semplice reazione in cui gli anticorpi legano antigeni corpuscolari (batteri, eritrociti o altre cellule, particelle insolubili con antigeni adsorbiti su di essi, nonché aggregati macromolecolari). Si verifica in presenza di elettroliti, ad esempio aggiungendo una soluzione isotonica di cloruro di sodio.

Varie opzioni di reazioneagglutinazione:

schierato,

indicativo,

indiretto, ecc.

Reazione di agglutinazione manifestata dalla formazione di scaglie o sedimento (cellule "incollate" con anticorpi aventi due o più siti di legame per l'antigene).

Ra è usato per:

1) determinazione degli anticorpi dolore da sierodi quelli, ad esempio, con brucellosi (reazione di Wright, Heddelson), febbre tifoide e paratifo (reazione di Vidal) e altre malattie infettive;

determinazione del patogeno , assegnato dal paziente;

determinazione dei gruppi sanguigni utilizzando anticorpi monoclonali contro gli allo-antigeni degli eritrociti.

Per determinare gli anticorpi del paziente metterereazione di agglutinazione dettagliata: aggiungere alle diluizioni del siero del sangue del paziente diagnostico(sospensione dei microbi uccisi) e dopo alcune ore di incubazione a 37 ° C, si nota la più alta diluizione del siero (titolo del siero), alla quale si è verificata l'agglutinazione, cioè si è formato un precipitato.

La natura e la velocità di agglutinazione dipendono dal tipo di antigene e anticorpi. Un esempio sono le caratteristiche dell'interazione dei diagnostici (antigeni O e K) con anticorpi specifici. Reazione di agglutinazione con O-diagnosticum(batteri uccisi dal calore, mantenuti termostabili O-antigene) si presenta sotto forma di agglutinazione a grana fine. La reazione di agglutinazione con l'H-diagnosticum (batteri uccisi dalla formalina, che tratteneva l'antigene H flagellare termolabile) è un cotone di grandi dimensioni e procede più velocemente.

Se è necessario determinare l'agente patogeno isolato dal paziente, mettere punto di riferimento reazione di agglutinazione vocale, utilizzando anticorpi diagnostici (siero agglutinante), ovvero viene eseguita la sierotipizzazione dell'agente patogeno. Una reazione indicativa viene condotta su un vetrino. Una coltura pura del patogeno isolato dal paziente viene aggiunta ad una goccia di siero diagnostico agglutinante alla diluizione 1:10 o 1:20. Accanto viene posto un controllo: al posto del siero viene applicata una goccia di soluzione di cloruro di sodio. Quando un sedimento flocculante appare in una goccia con siero e microbi, schierato reazione di agglutinazione in provette con diluizioni crescenti di siero agglutinante, alle quali aggiungere 2-3 gocce della sospensione del patogeno. L'agglutinazione è presa in considerazione dalla quantità di sedimento e dal grado di chiarificazione del liquido. La reazione è consideratapositivo se si nota agglutinazione ad una diluizione prossima al titolo del siero diagnostico. Allo stesso tempo, vengono presi in considerazione i controlli: il siero diluito con soluzione isotonica di cloruro di sodio dovrebbe essere trasparente, la sospensione di microbi nella stessa soluzione dovrebbe essere uniformemente torbida, senza sedimenti.

Diversi batteri correlati possono agglutinare con lo stesso siero agglutinante diagnostico, rendendoli difficili da identificare. Pertanto, usano sieri agglutinanti adsorbitibocche, da cui gli anticorpi cross-reattivi sono stati rimossi per adsorbimento ai loro batteri correlati. Questi sieri conservano anticorpi specifici solo per questo batterio. L'ottenimento di sieri agglutinanti diagnostici per monorecettori in questo modo è stato proposto da A. Castellani (1902).

Reazione indiretta (passiva) dell'emoagglutinala nazione (RNGA, RPGA) basato su usandoricerca sugli eritrociti(o lattice) con adsorbireantigeni sulla loro superficie oanticorpi, la cui interazione con il corrispondente anticorpi o antigeni sierici delle cause dei pazienti incollareformazione e perdita di eritrociti sul fondo del tubo o cellule sotto forma di sedimento smerlato.

Con una reazione negativa gli eritrociti si depositano sotto forma di un "bottone". Di solito, gli anticorpi vengono rilevati nell'RNGA utilizzando l'antigenic erythrocyte diagnosticum, che è eritrociti con antigeni adsorbiti su di essi. A volte viene utilizzata la diagnostica degli eritrociti anticorpali, su cui vengono adsorbiti gli anticorpi. Ad esempio, è possibile rilevare la tossina botulinica aggiungendovi un anticorpo eritrocitario botulinum diagnosticum (questa reazione è chiamata contraccolpoemoagglutinazione indiretta -RONGA). L'RNGA viene utilizzato per la diagnosi di malattie infettive, per la determinazione dell'ormone gonadotropico nelle urine quando si instaura una gravidanza, per la rilevazione dell'ipersensibilità a farmaci, ormoni e in alcuni altri casi.

Reazione di coagulazione. Le cellule dell'agente patogeno vengono determinate utilizzando stafilococchi, pretrattati con siero diagnostico immunitario. Stafilococchi contenenti proteine UN, avendo un'affinità per il frammento Fc delle immunoglobuline, adsorbono in modo non specifico gli anticorpi antimicrobici, che quindi interagiscono con i centri attivi con i corrispondenti microbi isolati dai pazienti. Come risultato della coagglutinazione, si formano scaglie costituite da stafilococchi, anticorpi del siero diagnostico e il microbo rilevato.

Reazione di inibizione dell'emoagglutinazione(RTGA) basata sul blocco, soppressione di anvirus tigens anticorpi del siero immunitario, a seguito dei quali i virus perdono la capacità di agglutinare gli eritrociti. RTGA viene utilizzato per diagnosticare molte malattie virali, i cui agenti causali (influenza, morbillo, rosolia, virus dell'encefalite da zecche, ecc.) Possono agglutinare gli eritrociti di vari animali.

Test di agglutinazione per la determinazione degli anticorpi anti-reso (reazione indirettacoomb) utilizzato in pazienti con emolisi intravascolare. In alcuni di questi pazienti si riscontrano anticorpi anti-reso incompleti, monovalenti. Interagiscono specificamente con gli eritrociti Rh-positivi, ma non ne provocano l'agglutinazione. La presenza di tali anticorpi incompleti è determinata da un test di Coombs indiretto. Per fare ciò, il siero antiglobulina (anticorpi contro le immunoglobuline umane) viene aggiunto al sistema di anticorpi anti-Rh + eritrociti Rh-positivi, che provoca l'agglutinazione degli eritrociti. Utilizzando la reazione di Coombs, vengono diagnosticate condizioni patologiche associate alla lisi intravascolare degli eritrociti di origine immunitaria, ad esempio la malattia emolitica dei neonati: gli eritrociti di un feto Rh-positivo si combinano con anticorpi incompleti al fattore Rh circolante nel sangue, che hanno attraversato la placenta da una madre Rh-negativa.

RICERCA SIEROLOGICA(Siero siero latino + dottrina logos greca) - metodi di immunologia che studiano le proprietà specifiche del sangue umano o animale al fine di identificare antigeni o anticorpi mediante reazioni sierologiche.

L'inizio di S. e. messo alla fine del secolo scorso, dopo che si è scoperto che la connessione di un antigene con un anticorpo (vedi Antigene - reazione anticorpale) è accompagnata da una serie di fenomeni disponibili per l'osservazione visiva - agglutinazione (vedi), precipitazione (vedi) o lisi. Esiste la possibilità di un riconoscimento specifico di antigeni (vedi) o anticorpi (vedi), se uno di questi componenti è noto.

Nel 1897 F. Vidal riferì che il siero del sangue di pazienti con febbre tifoide agglutina selettivamente i batteri tifoidi e quindi questa reazione (vedi la reazione di Vidal) può essere utilizzata per il laboratorio. diagnostica della febbre tifoide. Nello stesso anno è stato dimostrato che i filtrati di colture di batteri della peste, del tifo e del colera, quando combinati con i corrispondenti sieri immuni, formano fiocchi o precipitano.

La reazione di precipitazione si è rivelata adatta alla rilevazione di eventuali antigeni proteici. Nel 1900-1901. K. Landsteiner ha scoperto che negli eritrociti delle persone ci sono due diversi antigeni (A e B) e nel siero del sangue ci sono due agglutinine (a e P), che hanno contribuito all'uso della reazione di emoagglutinazione per determinare i gruppi sanguigni (vedi) .

La reazione di agglutinazione per determinare il gruppo sanguigno e il fattore Rh viene utilizzata nella pratica ostetrica, nelle trasfusioni di sangue e nel trapianto di tessuti. Gli anticorpi contro il fattore Rh (vedi) sono anticorpi incompleti, non sono in grado di reagire direttamente con eritrociti Rh-positivi, quindi, per rilevarli, viene utilizzata la reazione di Coombs (vedi reazione di Coombs), basata sulla rilevazione di incompleti anticorpi che utilizzano sieri antiglobulina. Il siero del sangue in esame viene aggiunto agli eritrociti di specificità nota, seguito dal siero antiglobulina contro le IgG (reazione di Coombs indiretta). I frammenti Fab di anticorpi incompleti del siero del sangue analizzato si legano agli eritrociti e gli anticorpi anti-IgG si legano ai frammenti Fc liberi di questi anticorpi e gli eritrociti si agglutinano. Per la diagnosi di anemia emolitica viene utilizzata una reazione di Coombs diretta.Nel corpo di tali pazienti, gli eritrociti si combinano con gli anticorpi contro il fattore Rh che circola nel sangue. Per identificarli, agli eritrociti prelevati dal paziente vengono aggiunti anticorpi contro le IgG. La comparsa dell'agglutinazione eritrocitaria conferma la diagnosi della malattia.

La reazione di inibizione dell'emoagglutinazione - RTGA (vedi. Emoagglutinazione) - si basa sul fenomeno della prevenzione (inibizione) da parte del siero immunitario dell'emoagglutinazione degli eritrociti da parte dei virus. Il fenomeno dell'emoagglutinazione virale non è sierologico. reazione e si verifica a causa della connessione del virus con i recettori degli eritrociti, tuttavia, RTGA è una reazione sierologica utilizzata per rilevare e titolare gli anticorpi antivirali. RTGA è il principale metodo di sierodiagnosi di influenza, morbillo, rosolia, parotite, encefalite da zecche e altre infezioni virali, i cui agenti causali hanno proprietà emoagglutinanti.

La reazione di emoagglutinazione passiva o indiretta, Utilizza eritrociti o chimica sintetica neutra (ad esempio particelle di lattice), sulla cui superficie vengono assorbiti antigeni (batterici, virali, tissutali) o anticorpi (vedi reazione di Boyden). La loro agglutinazione si verifica quando vengono aggiunti i sieri o gli antigeni appropriati. Gli eritrociti sensibilizzati con antigeni sono chiamati diagnostici antigenici degli eritrociti e vengono utilizzati per rilevare e titolare gli anticorpi. Gli eritrociti sensibilizzati dagli anticorpi sono chiamati immunoglobuline eritrociti diagnostici (vedi) e vengono utilizzati per rilevare gli antigeni:

La reazione di emoagglutinazione passiva viene utilizzata per diagnosticare malattie causate da batteri (febbre tifoide e paratifo, dissenteria, brucellosi, peste, colera, ecc.), protozoi (malaria) e virus (influenza, infezioni da adenovirus, encefalite da zecche, febbre emorragica di Crimea , ecc.) ... La reazione dell'emoagglutinazione passiva nella sensibilità non è inferiore al metodo di isolamento del virus nelle malattie dell'arenovirus (vedi), in particolare nella coriomeningite linfocitica. L'antigene virale della coriomeningite linfocitaria viene rilevato nei portatori di virus (topi domestici) in una reazione di emoagglutinazione passiva con sospensioni di organi estratti diluite decine di migliaia di volte. In caso di salmonellosi nella reazione dell'emoagglutinazione passiva, i batteri vengono determinati a una concentrazione fino a diverse centinaia di corpi microbici in 1 g di feci, i batteri della dissenteria nei prodotti alimentari vengono rilevati quando ci sono almeno 500 corpi microbici in 1 g di materiale .

La reazione di emoagglutinazione passiva viene utilizzata nella diagnosi e nella prevenzione dell'epatite virale B. In Unione Sovietica, per rilevare l'antigene HBs (vedi antigene australiano) nel sangue dei pazienti con epatite B acuta, viene effettuata una diagnosi, che è eritrociti di pollo sensibilizzato con immunoglobuline di capra contro l'antigene HBs. Una goccia del diagnosticum viene combinata con un uguale volume di siero sanguigno delle persone esaminate e, se in esso è presente l'antigene HBs, si verifica l'agglutinazione. La reazione è in grado di catturare fino a 1,5 ng/ml di antigene HBs. Per rilevare gli anticorpi HBs, vengono utilizzati eritrociti con antigene HBs, isolati dal sangue dei pazienti, adsorbiti su di essi. La reazione di emoagglutinazione passiva viene anche utilizzata per identificare l'ipersensibilità del paziente a farmaci e ormoni, ad esempio penicillina o insulina. In questo caso, gli eritrociti del gruppo sanguigno umano 0 vengono sensibilizzati con un farmaco e quindi utilizzati per rilevare le agglutinine nel siero del sangue del paziente.

La reazione di emoagglutinazione passiva viene utilizzata per rilevare l'ormone gonadotropico nelle urine al fine di stabilire una gravidanza (vedi gonadotropina corionica). Per questo, un siero standard per questo ormone viene incubato con l'urina da esaminare. Con la successiva aggiunta di eritrociti con l'ormone assorbito su di essi, non si verifica l'agglutinazione (risposta positiva), poiché l'ormone contenuto nelle urine ha neutralizzato gli anticorpi agglutinanti.

Reazioni basate sul fenomeno delle precipitazioni

Sono utilizzati per rilevare un'ampia varietà di antigeni e anticorpi. L'esempio più semplice di una reazione qualitativa è la formazione di una banda di precipitazione opaca al confine della deposizione antigene-anticorpo in una provetta. Vari tipi di reazioni di precipitazione in agar semiliquido o gel di agarosio sono ampiamente utilizzati (metodo della doppia immunodiffusione secondo Ouchterlon, metodo dell'immunodiffusione radiale, immunoelettroforesi), alla segale sono sia qualitative che quantitative (vedi.Immunodiffusione, Immunoelettroforesi).

Per realizzare la doppia immunodiffusione, si versa uno strato di gel fuso su una lastra di vetro e, dopo l'indurimento, si ritagliano pozzetti del diametro di 1,5-3 mm. Gli antigeni del test sono posti nei pozzetti situati in un cerchio e il siero immunitario di specificità nota è posto nel pozzetto centrale. Diffondendo l'uno verso l'altro, sieri e antigeni omologhi formano un precipitato. Con l'immunodiffusione radiale (con il metodo Mancini), il siero immunitario viene aggiunto all'agar. L'antigene posto nei pozzetti si diffonde attraverso l'agar e, a seguito della precipitazione con siero immunitario, si formano anelli opachi attorno ai pozzetti, il cui diametro esterno è proporzionale alla concentrazione dell'antigene. Una modifica di questa reazione viene utilizzata nella diagnosi dell'influenza per riconoscere gli anticorpi IgM e IgG (vedi Immunoglobuline). L'antigene dell'influenza viene aggiunto all'agar e il siero sanguigno viene aggiunto ai pozzetti. Quindi le piastre vengono trattate con sieri immuni contro gli anticorpi IgM o IgG, il che aiuta a identificare la reazione degli anticorpi corrispondenti con gli antigeni. Il metodo consente di determinare contemporaneamente i titoli degli anticorpi e la loro appartenenza a una determinata classe di immunoglobuline.

Un tipo di immunoelettroforesi è la radioimmunoforesi. In questo caso, dopo la separazione elettroforetica degli antigeni nel solco tagliato parallelamente al movimento degli antigeni nel gel, si è prima versato il siero immunitario marcato con iodio radioattivo contro gli antigeni determinati, quindi il siero immunitario contro gli anticorpi IgG, i bordi dell'anticorpo formato -i complessi antigenici precipitano. Tutti i reagenti non legati vengono lavati e il complesso antigene-anticorpo viene rilevato mediante autoradiografia (vedi).

Reazioni che coinvolgono il complemento. Le reazioni che coinvolgono il complemento (vedi) si basano sulla capacità del sottocomponente del complemento Cl (Clq) e quindi di altri componenti del complemento di legarsi agli immunocomplessi.

La reazione di fissazione del complemento consente di titolare antigeni o anticorpi in base al grado di fissazione del complemento da parte di un complesso antigene-anticorpo. Questa reazione consiste in due fasi: l'interazione dell'antigene con il siero del sangue testato (sistema di test) e l'interazione del siero emolitico con gli eritrociti di pecora (sistema di indicatori). Con una reazione positiva nel sistema in studio, si verifica il legame del complemento e quindi quando si aggiungono eritrociti sensibilizzati agli anticorpi, non si osserva emolisi (vedere Reazione di legame del complemento). La reazione è ampiamente utilizzata per la sierodiagnosi della sifilide viscerale (vedi la reazione di Wasserman) e delle infezioni virali (vedi Studi virologici).

Citolisi. Gli anticorpi contro le strutture cellulari possono, con la partecipazione del complemento, dissolvere le cellule che portano queste strutture. La lisi degli eritrociti può essere facilmente valutata dal grado e dall'intensità del rilascio di emoglobina. La lisi delle cellule nucleari viene valutata calcolando la percentuale di cellule morte che non sono colorate con blu di metilene. Viene spesso utilizzato anche il cromo radioattivo, che viene preventivamente legato chimicamente alle cellule. Il numero di cellule distrutte è determinato dalla quantità di cromo non legato rilasciato durante la lisi cellulare.

La reazione di emolisi radiale degli eritrociti può avvenire in un gel. Una sospensione di eritrociti di montone viene posta in un gel di agarosio addizionato di complemento; vengono praticati dei fori nello strato congelato sul vetro e in essi viene introdotto il siero emolitico. Intorno ai pozzetti si formerà una zona di emolisi a causa della diffusione radiale degli anticorpi. Il raggio della zona di emolisi è direttamente proporzionale al titolo sierico. Se assorbi qualsiasi antigene sugli eritrociti, ad esempio l'emoagglutinina glicoproteica del virus dell'influenza, della rosolia o dell'encefalite da zecche, puoi riprodurre il fenomeno dell'emolisi da parte dei sieri immuni a questi virus. La reazione dell'emolisi radiale nel gel ha trovato applicazione nella diagnosi delle infezioni virali grazie alla sua semplicità di impostazione, insensibilità agli inibitori sierici e alla capacità di titolare il siero sanguigno lungo il diametro della zona di emolisi senza ricorrere a diluizioni seriali.

Adesione immunitaria. Globuli rossi, piastrine e altri globuli hanno recettori sulla superficie per il terzo componente del complemento (C3). Se il corrispondente siero immunitario e complemento vengono aggiunti all'antigene (batteri, virus, ecc.), Si forma un complesso antigene-anticorpo, ricoperto dal componente C3 del complemento. In miscela con le piastrine, grazie alla componente C3 del complemento, il complesso antigene-anticorpo si depositerà sulle cellule e ne farà agglutinare (vedi Adesione immunitaria). Questa reazione viene utilizzata per determinare gli antigeni del sistema HLA (vedi Immunità al trapianto) e quando si studia una serie di infezioni virali (encefalite da zecche, febbre dengue), la segale è accompagnata da immunopathol. processi e circolazione degli antigeni virali nel sangue in combinazione con gli anticorpi.

La reazione di neutralizzazione si basa sulla capacità degli anticorpi di neutralizzare determinate funzioni specifiche di antigeni macromolecolari o solubili, ad esempio attività enzimatica, tossine batteriche, patogenicità dei virus. In batteriologia, questa reazione viene utilizzata per rilevare antistreptolisine, antistreptochinasi e antistafilolisine. La reazione di neutralizzazione delle tossine può essere valutata mediante biol. effetto, quindi, ad esempio, titolare antitetano e sieri antibotulinici (vedi Tossina - reazione antitossina). La miscela di tossina e antisiero iniettata negli animali ne previene la morte. Varie varianti della reazione di neutralizzazione sono utilizzate in virologia. Mescolando i virus con un antisiero appropriato e introducendo questa miscela negli animali o nelle colture cellulari, si neutralizza la patogenicità dei virus.

Reazioni che utilizzano tag chimici e fisici

L'immunofluorescenza, sviluppata da A. N. Coons nel 1942, viene utilizzata per il sierolo. reazioni di siero marcato con fluorocromo (vedi. Immunofluorescenza). Il siero marcato con fluorocromo forma un complesso antigene-anticorpo con l'antigene, to-ry diventa disponibile per l'osservazione al microscopio a raggi ultravioletti che eccitano il bagliore del fluorocromo. La reazione di immunofluorescenza diretta viene utilizzata per studiare gli antigeni cellulari, rilevare il virus nelle cellule infette e rilevare i batteri e la rickettsia negli strisci. Quindi, per la diagnosi di rabbia, le impronte di pezzi di cervello di animali sospettati di essere portatori di un virus vengono trattate con siero antirabbico luminescente. Con un risultato positivo, si osservano grumi di colore verde brillante nel protoplasma delle cellule nervose. La diagnostica rapida dell'infezione da influenza, parainfluenza e adenovirus si basa sulla rilevazione di antigeni virali nelle cellule delle impronte della mucosa nasale.

Il metodo dell'immunofluorescenza indiretta è più ampiamente utilizzato, basato sul rilevamento di un complesso antigene-anticorpo mediante siero immunitario luminescente contro anticorpi IgG e viene utilizzato per rilevare non solo antigeni, ma anche titolazione di anticorpi. Il metodo ha trovato applicazione nella sierodiagnostica dell'herpes, del citomegalip e della febbre di Lassa. In laboratorio, uno stock di preparati cellulari contenenti antigeni dovrebbe essere conservato a -20 ° C, ad esempio cellule VERO cresciute su pezzi di vetro sottili e infettate con un virus o fibroblasti di pollo fissati con acetone. Il siero del sangue in esame viene stratificato sui preparati, il preparato viene posto in un termostato a f 37 ° per formare immunocomplessi e quindi, dopo aver lavato i reagenti non legati, questi complessi vengono rilevati con siero luminescente etichettato contro globuline umane. Utilizzando sieri immuni marcati contro gli anticorpi IgM o IgG, è possibile differenziare il tipo di anticorpi e rilevare una risposta immunitaria precoce grazie alla presenza di anticorpi IgM.

Nel metodo enzimatico-immunologico vengono utilizzati anticorpi coniugati con enzimi, cap. arr. perossidasi di rafano o fosfatasi alcalina. Per rilevare il composto del siero marcato con l'antigene, viene aggiunto un substrato, che viene decomposto da un enzima attaccato al siero con l'aspetto di un colore giallo-marrone (perossidasi) o giallo-verde (fosfatasi). Usano anche enzimi che decompongono non solo il substrato cromogenico, ma anche lumogenico. In questo caso, con una reazione positiva, appare un bagliore. Come l'immunofluorescenza, il metodo enzimatico viene utilizzato per rilevare gli antigeni nelle cellule o per titolare gli anticorpi sulle cellule contenenti antigeni.

Il tipo più popolare di metodo immunologico enzimatico è l'immunoassorbimento. Su un supporto solido, che può essere cellulosa, poliacrilammide, destrano e plastiche varie, assorbono l'antigene. Molto spesso, il vettore è la superficie dei pozzetti del micropannello. Il siero del sangue in esame viene aggiunto ai pozzetti con l'antigene assorbito, quindi l'antisiero marcato con l'enzima e il substrato. I risultati positivi sono presi in considerazione dal cambiamento nel colore del mezzo liquido. Per rilevare gli antigeni, gli anticorpi vengono assorbiti sul supporto, quindi il materiale di prova viene introdotto nei pozzetti e la reazione viene sviluppata con un siero antimicrobico marcato con enzima.

Il metodo radioimmunologico si basa sull'uso di un marcatore radioisotopico di antigeni o anticorpi. È stato originariamente sviluppato come metodo specifico per misurare il livello di ormoni circolanti nel sangue. Il sistema di test era un ormone marcato con isotopi (antigene) e un antisiero ad esso. Se un materiale contenente l'ormone desiderato viene aggiunto a un tale antisiero, legherà parte degli anticorpi; con la successiva introduzione dell'ormone titolato marcato, una quantità ridotta di esso si legherà agli anticorpi rispetto al controllo. Il risultato viene valutato confrontando le curve dell'etichetta radioattiva legata e non legata. Questo tipo di metodo è chiamato reazione competitiva. Esistono altre modifiche al metodo di dosaggio radioimmunologico. Il metodo radioimmunologico è il metodo più sensibile per la determinazione di antigeni e anticorpi, utilizzato per la determinazione di ormoni, farmaci e antibiotici, per la diagnosi di malattie batteriche, virali, rickettsie, protozoarie, per lo studio delle proteine ​​del sangue, degli antigeni tissutali.

Caratteristiche comparative e uso dei metodi di ricerca sierologica nella pratica medica

I metodi di S. e. vengono costantemente migliorati nella direzione di aumentare la sensibilità e la versatilità di utilizzo. Inizialmente siero. la diagnosi si è basata sulla rilevazione degli anticorpi. Con la comparsa a metà del XX secolo. reazioni di immunofluorescenza ed emoagglutinazione passiva, che sono più sensibili, è diventato possibile rilevare non solo gli anticorpi, ma anche l'antigene direttamente nel materiale dei pazienti. I metodi enzimatico-immunologici e radioimmunologici, che sono 2-3 ordini di grandezza superiori in sensibilità rispetto all'immunofluorescenza e all'emoagglutinazione passiva, si avvicinano ai metodi del biol. rilevamento di batteri e virus. L'ambito della loro applicazione per la rilevazione sia di antigeni che di anticorpi è teoricamente illimitato.

Sierodiagnostica inf. malattie si basa sulla comparsa di anticorpi contro un patogeno isolato o sospetto, indipendentemente dal fatto che l'agente patogeno sia stato rilevato nella fase acuta della malattia. Indagare su coppie di sieri del sangue prelevati all'inizio della malattia e 2-3 settimane. dopo. Un aumento degli anticorpi nel secondo siero sanguigno di almeno 4 volte rispetto al primo è diagnosticamente significativo. È importante anche da quale classe di anticorpi delle immunoglobuline sono rappresentati. Gli anticorpi IgM vengono rilevati alla fine del periodo acuto della malattia e nella fase iniziale della convalescenza. Gli anticorpi IgG compaiono in una fase successiva della convalescenza e circolano a lungo. Se si scopre che una donna nel primo trimestre di gravidanza ha anticorpi IgM contro il virus della rosolia, questa è la base per l'interruzione della gravidanza, poiché durante questo periodo il feto è particolarmente sensibile al virus. Con diversi inf. malattie, usano selettivamente i metodi più specifici e convenienti.

Sabbia. ampiamente utilizzato in epidemiologia. La raccolta sistematica e lo studio di campioni di sangue di vari gruppi della popolazione consente di comprendere i contatti della popolazione con la fonte di agenti patogeni inf. malattie. Lo studio del livello di immunità di gregge consente di identificare i gruppi ad alto rischio e pianificare le attività di vaccinazione, per studiare la diffusione geografica delle infezioni. Sabbia. differenti fasce di età della popolazione hanno permesso, ad esempio, di identificare retrospettivamente la circolazione di diverse varianti del virus influenzale in determinati periodi di tempo.

Sabbia. sono di grande importanza nello studio delle malattie ereditarie (vedi) e delle malattie autoimmuni, accompagnate dalla comparsa di anticorpi specifici per tessuti e organi che distruggono le corrispondenti cellule bersaglio, nonché in oncologia per la rilevazione di antigeni tumorali. Pertanto, l'immunodiagnosi del cancro del fegato si basa sulla determinazione dell'alfa-fetoproteina e di altri antigeni embrionali nel siero del sangue dei pazienti mediante metodi di immunodiffusione e radioimmunologia.

Grazie all'uso del sierolo si ottengono progressi scientifici significativi nello studio della struttura antigenica fine di antigeni cellulari, antigeni di batteri e virus. reazioni di anticorpi monoclonali, to-rye possono essere ottenute per separare i determinanti dell'antigene.

Bibliografia: Metodi di ricerca in immunologia, ed. I. Lefkovits e B. Pernis, trad. dall'inglese., M., 1981; Guida all'immunologia, ed. OE Vyazov e Sh. X. Khodzhaeva, M., 1973; Linee guida per la diagnostica clinica di laboratorio, ed. V.V. Menshikov, M., 1982; Immunologia, ed. di J.-F. Bach, N.Y., 1978.

S. Ya. Gaidamovich.

Ricerca sierologica (test)- metodi di ricerca di laboratorio basati sulla rilevazione di anticorpi o antigeni nel materiale biologico del paziente. Molto spesso, il sangue viene utilizzato per l'analisi, meno spesso urina, saliva, secrezione purulenta o campioni di tessuto prelevati durante una biopsia.

Area di applicazione

• Determinazione del gruppo sanguigno.
• Identificazione di specifiche proteine ​​tumorali - marcatori tumorali (ad esempio, in caso di sospetto cancro delle ovaie, della prostata, della vescica, dello stomaco, ecc.).
• Diagnostica di infezioni virali, batteriche, fungine, protozoarie (HIV, sifilide, toxoplasmosi, clamidia, rosolia, herpes, elmintiasi, encefalite da zecche, ecc.).
• Determinazione di ormoni, enzimi e farmaci contenuti nel biomateriale studiato in concentrazioni minori (inferiori a 10-10 g/l).

L'essenza del metodo sono i test sierologici

I test sierologici differiscono nella loro tecnica, ma sono tutti il ​​risultato dell'interazione di antigeni (composti estranei) con gli anticorpi corrispondenti. Lo studio si compone di due fasi successive. La prima fase è caratterizzata dall'interazione tra antigeni e anticorpi con la formazione di immunocomplessi (reazione positiva). Nella seconda fase compaiono segni esterni, che confermano la presenza di questi stessi complessi (a seconda del tipo di reazione, può essere una torbidità della soluzione di prova, un cambiamento nel suo colore, perdita di scaglie, ecc.). L'assenza di fenomeni fisici visibili è considerata un risultato negativo del test.

Preparazione ai test sierologici

Dipende dal tipo di studio. Un medico specialista dovrebbe parlare delle peculiarità del superamento di un test specifico quando si fissa un appuntamento per la procedura.

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La reazione di immobilizzazione del treponema pallido(RIB). Un prerequisito è l'esclusione dell'assunzione di antibiotici da parte del paziente prima dell'esame, che hanno un effetto tossico sul treponema pallido, causando la loro immobilizzazione non specifica.

Risultati positivi di RIBT vengono rilevati approssimativamente dalla metà del periodo fresco secondario della sifilide e possono persistere a lungo dopo il trattamento. Se necessario, il metodo viene utilizzato per rilevare gli anticorpi nel liquido cerebrospinale; questo studio si distingue per un'elevata specificità, ma una bassa sensibilità (circa il 40%).

Il RIBT non è molto adatto per la diagnosi delle forme precoci di sifilide a causa della comparsa tardiva (non prima di 8-9 settimane dal momento dell'infezione) di AT-immobilisine; il metodo può dare risultati falsi positivi, soprattutto in pazienti con patologia autoimmune, malattie maligne, diabete. Inoltre, RIBT è un'analisi piuttosto complessa, lunga e costosa che richiede personale altamente qualificato e la disponibilità di un vivaio, e quindi negli ultimi anni è stata utilizzata solo in alcuni laboratori. Nella diagnostica, il RIBT viene utilizzato come reazione arbitrale in caso di discrepanza tra i risultati di altri studi sierologici, per differenziare i risultati falsi positivi e quando si stabilisce una diagnosi di forme tardive di sifilide.

La reazione del complemento di legame con l'antigene treponemico (CSC con TA) La sensibilità del metodo è di circa l'80%, la specificità è del 98%. Il metodo faceva parte di una serie di test sierologici standard per la sifilide, regolati dall'ordine del Ministero della salute dell'URSS n. 1161 del 09/02/1985 "Sul miglioramento della diagnosi sierologica della sifilide". Attualmente, l'uso di questa reazione, come le CSC con antigene cardiolipina, è limitato ai singoli laboratori.

Reazione di immunofluorescenza (RIF)... Per diagnosticare la sifilide, vengono utilizzate diverse modifiche del RIF: RIF-c - per rilevare AT nel liquor, RIF-200 (il siero testato viene diluito 200 volte prima della reazione); RIF-abs (RIF con assorbimento), IgM-RIF-abs (per la determinazione di AT IgM). In termini di sensibilità e specificità, RIF-abs non è inferiore a RIBT, ma l'implementazione di questo metodo è molto più semplice. I risultati di RIF-abs diventano positivi dalla 3a settimana dopo l'infezione (prima della comparsa di un forte chancre o contemporaneamente ad esso), questo è un metodo di diagnosi precoce della sifilide. Frequenti risultati positivi dello studio molti anni dopo il trattamento completo della sifilide precoce e nei pazienti con sifilide tardiva - per decenni.

Indicazioni per l'esecuzione di RIF-abs:

• risultati positivi di NTT in donne in gravidanza in assenza di dati clinici e anamnestici indicanti la sifilide;
• esame di persone con varie malattie somatiche e infettive, in cui si notano risultati NTT positivi;
• esame di persone con manifestazioni cliniche caratteristiche della sifilide, ma con risultati NTT negativi;
• diagnosi precoce della sifilide;
• in alcuni casi - come criterio per il successo del trattamento antisifilitico: il passaggio di RIF-abs positivi a negativi dopo il trattamento è un criterio al 100% per la cura della sifilide.

IgM – RIF – abs sono utilizzati per la rilevazione separata di anticorpi delle classi Ig, che è di particolare interesse nella diagnosi della sifilide congenita, quando gli anticorpi contro il treponema, sintetizzati nel corpo del bambino, sono rappresentati da IgM e gli anticorpi IgG sono di origine materna. Le indicazioni per questo studio sono: diagnosi di sifilide congenita; valutazione dei risultati del trattamento della sifilide precoce.

RIF ha un'elevata sensibilità (98,5%) e specificità (99,6%) per quasi tutte le forme di sifilide. Gli svantaggi del RIF sono: l'impossibilità di automatizzare lo studio e registrare i risultati; difficoltà nella preparazione di un antigene di alta qualità da una sospensione di treponemi pallidi ottenuti dal testicolo di un coniglio infetto; soggettività nella valutazione dei risultati.

Reazione di emoagglutinazione passiva (RPHA)... Il confronto dei risultati ottenuti utilizzando RPHA e RIBT, RIF-abs, DAC, MRP ha mostrato un'elevata sensibilità e specificità di RPHA nella diagnosi di sifilide, che coincide con i risultati di RIF-abs.

La RPHA può essere eseguita in versione qualitativa e quantitativa; ci sono macro e micromodifiche. Il metodo quantitativo dell'RPHA consente di valutare la concentrazione di specifici anticorpi treponemici nel sangue. Titoli da 1: 640 e inferiori sono tipici dei pazienti trattati in passato per la sifilide. I titoli più alti sono di solito per l'infezione attiva non trattata.

I risultati positivi dell'RPHA, di regola, si notano 3 settimane dopo la comparsa di un forte chancre e poi in pazienti che hanno subito la sifilide per molti anni, spesso per tutta la vita.

La sensibilità dell'RPHA è del 76% nella sifilide primaria; 100% per la sifilide secondaria; 97% con sifilide latente; 94% con sifilide tardiva. La specificità di RPHA è superiore alla specificità di RIF-abs ed è del 99%.

A causa del rapporto tra elevata specificità, sensibilità, facilità di implementazione, standardizzazione dei reagenti tra i test treponemici per la sierodiagnosi della sifilide, l'RPHA occupa costantemente un posto di primo piano nella pratica clinica nel mondo.

I vantaggi specifici di ELISA sono: elevata sensibilità e specificità del metodo; automazione della messa in scena di una reazione; un alto grado di standardizzazione; la capacità di studiare un gran numero di campioni di siero; nella contabilità quantitativa e nella documentazione oggettiva dei risultati ottenuti; la possibilità di determinazione simultanea del titolo di anticorpi anti-treponemici di diverse classi (IgG e IgM) in un campione; idoneità per la diagnosi precoce della sifilide e la diagnosi della sifilide congenita; nella facilità d'uso per l'analisi del sangue in un servizio di trasfusione di sangue; applicabilità come test treponemico specifico di conferma. Sensibilità ELISA 98-100%, specificità 96-100%.

Gli svantaggi dell'ELISA includono: inadeguatezza per lo studio di campioni singoli; un periodo più lungo per ottenere un risultato e una durata di conservazione più breve dei kit ELISA, ad esempio, rispetto a RPHA.

Macchia immunitaria (IB). Uno dei metodi moderni per diagnosticare la sifilide è l'IB per la determinazione degli anticorpi IgG o IgM contro alcuni AH di treponema pallidum.

Il metodo ha un'elevata sensibilità (fino al 100%), specificità (98%) e riproducibilità (100%). Lo studio consente di studiare lo spettro degli anticorpi contro diversi antigeni di T. pallidum contemporaneamente, l'uso di antigeni ricombinanti e peptidici altamente purificati, che riducono al minimo la reattività aspecifica dei sieri.

Tutto ciò determina la possibilità di preferenza per l'utilizzo del metodo IB rispetto ad altri test treponemici per la verifica della diagnosi di sifilide nei casi difficili, in particolare per la diagnosi di sifilide nella seconda metà del periodo di incubazione, sifilide congenita latente nei primi giorni di un vita del bambino, per rilevare la sifilide latente in persone con risposta umorale debole, nonché per differenziare i risultati falsi positivi da altri test.