Диагностика коронавирусной инфекции методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Общие комплексы для собак и кошек

С каждым годом, благодаря научному прогрессу, появляются новые, современные методики и диагностики заболеваний животных. Сейчас, практически в любой ветеринарной клинике, проводится ПЦР диагностика инфекций любых домашних животных. В клинике «Лапки-царапки» имеется специальная лаборатория, в которой можно провести различного рода анализы.

Благодаря этим инновационным разработкам мы можем своевременно правильно диагностировать любые инфекционные заболевания домашних любимцев. Особенно это важно при серьезных заболеваниях, которые необходимо выявлять на ранних стадиях и которые не всегда можно определить при других клинических анализах или УЗИ. П олимеразная цепная реакция (ПЦР) является незаменимым методом диагностики для проведения важных ветеринарных исследований, и используется параллельно с бактериологическим и иммунохимическим методами.

При клинике «Лапки-царапки» находится специальная лаборатория ПЦР диагностики инфекций животных. Мы оказываем услуги по Ленинградской области и Санкт-Петербургу. Отличительная особенность наших услуг - заборы проб у вас на дому и бесплатная курьерская служба.

ПЦР диагностика инфекций - это самый точный, современный, быстрый способ исследования в ветеринарной вирусологии и микробиологии, позволяющий не только выявить заболевания, но и определить РНК, ДНК вируса и антитела к нему.

Преимущества ПЦР диагностики:

Возможность выявить инфекцию в случаях, когда другими методами это определить невозможно

Скорость исследования, которая объясняется тем, что не требуется длительное время выращивать и определять возбудителей

Процесс полностью автоматизированный и стандартизированный, что исключает даже малейшие ошибки, в отличие от ручных исследований

Результат исследований готов в течение 12 часов

Диагностика - универсальна, так как помогает определить возбудителей в различных жидкостях и биологических тканях

Огромное значение ПЦР диагностика животных имеет на ранних стадиях таких заболеваний, как бруцеллез, хламидиоз, лейкоз, лептоспироз, листериоз и многих других. Использование этого метода дало возможности разработать уникальные программы по успешному оздоровлению большинства инфекционных и вирусных заболеваний домашних животных.

Воспользуйтесь этим уникальным методом диагностики, если хотите, чтобы ваш домашний любимец был здоров и радовал вас долгие годы! ПЦР диагностика инфекций часто является единственным шансом для спасения жизни! По любым возникшим у вас вопросам, вам подробно ответят специалисты клиники «Лапки-царапки» в онлайн-режиме или по телефонам. Обращайтесь, мы всегда придем на помощь к вашим питомцам!

Крылова Дарья Дмитриевна, молекулярный биолог, заведующая отделением ПЦР диагностики независимой ветеринарной лаборатории “Поиск”, г. Санкт-Петербург.

Для начала хотелось бы определиться, в чем же заключается смысл метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) с практической точки зрения, с точки зрения ветеринарного врача. Что же должен точно понимать доктор, назначающий анализ методом ПЦР… Я не буду вдаваться ни в какие сугубо профессиональные подробности молекулярных механизмов, задействованных при проведении ПЦР. Хочется только, чтобы ветеринарный врач четко осознавал: метод ПЦР является прямым, и при проведении такого исследования предполагается, что из того клинического материала, который прислан в лабораторию, возможно выделить нуклеиновую кислоту (ДНК или РНК) предполагаемого возбудителя. Это является главным постулатом. Но, несмотря на этот постулат, я очень часто сталкиваюсь с мнением, которое я назову Мифом 1 , о том, что любой возбудитель любого заболевания может быть обнаружен методом ПЦР в крови. Строго говоря, в данном случае кровь фигурирует как некий собирательный образ универсального материала для исследования. Часто от нас хотят, чтобы мы поработали «со всем и на все». Это невозможно, к сожалению. Как же определить, какой возбудитель может быть найден с помощью ПЦР, а какой нет? При отборе материала для исследования методом ПЦР доктор должен в первую очередь представлять себе патогенез заболевания или заболеваний, возбудителей которых он хочет обнаружить. Если прижизненный забор необходимого материала у животного невозможен, то не стоит назначать такую диагностику. В настоящее время в арсенале лабораторий есть множество доступных способов диагностики, например метод иммуноферментного анализа. Этот метод позволяет определить наличие антител к возбудителю, их количество и по определенным критериям с большой долей достоверности – статус заболевания. Для большей ясности можно рассмотреть конкретные примеры. В очередной раз остановимся на коронавирусе кошек и, конкретно, на инфекционном перитоните. В момент мутации вируса, находящегося в кишечнике кошки, он приобретает сродство к моноцитам. Заражая моноцит, вирус попадает в кровоток кошки, это бесспорный факт, но моноцит находится в кровотоке совсем недолго, в норме около 3 дней, а дальше он должен претерпеть свою окончательную дифференцировку в тканевой макрофаг. Поэтому моноцит вместе с коронавирусом уходит из кровотока через стенки сосудов в ткани, где становится макрофагом. Есть данные, что коронавирус еще и стимулирует ускоренную дифференцировку моноцита. Из этого следует, что коронавирус, несомненно, какое-то очень короткое время находится в периферической крови животного, и, конечно же, его можно там обнаружить, но это очень редкая находка, и диагностическая значимость исследования крови на наличие коронавируса методом ПЦР является нулевой, поскольку отрицательный результат такого исследования, к сожалению, не исключает наличия коронавирусной инфекции. Также иногда у доктора есть стремление найти в крови методом ПЦР парвовирус собак и кошек. Могу предположить, что такое желание основано на лейкопении, наблюдающейся при панлейкопении или парвовирусном энтерите. Вероятно, кто-то считает, что эта лейкопения является результатом уничтожения лейкоцитов вирусом непосредственно в кровотоке. Давайте рассуждать логически: парвовирус является ДНК-содержащим вирусом, а для успешного размножения и распространения ДНК-содержащему вирусу необходимо встроиться в геном хозяина, причем в клетки, активно делящиеся, иначе как вирус будет размножаться? Всем известно, что лейкоциты в норме в крови все же не делятся. А делятся их предшественники в костном мозге. Парвовирус поражает костный мозг, и лейкопения возникает в результате уничтожения клеток-предшественников в костном мозге. Также активно делящимися клетками являются клетки ворсин кишечника, где парвовирус успешно реплицируется, и самым хорошим материалом для исследования на парвовирусную инфекцию являются экскременты животного, с помощью которых вирус распространяется во внешней среде. В общем, коронавирус и парвовирус используют кровь только в качестве, условно говоря, транспортной среды для достижения конечной локализации и покидают кровоток достаточно быстро. Есть вирусы, которые вообще не выходят в кровоток. В качестве примеров можно привести калицивирус и герпесвирус кошек. Репликация этих вирусов чаще всего ограничивается лимфоидной тканью рото- и носоглотки. Калицивирусная инфекция может протекать системно, но это достаточно редкие и тяжелые случаи.

Раз уж речь пошла о вирусных инфекциях, хотелось бы отметить, что метод ПЦР очень точен и очень специфичен, но эта специфичность и лабильность генома вирусов, особенно РНК-содержащих, в реальности может привести к тому, что конкретная тест-система для исследования методом ПЦР может обнаруживать лишь какой-то определенный штамм или несколько штаммов конкретного вируса. В качестве примера опять-таки можно рассмотреть калицивирус кошек, который имеет огромное количество сильно отличающихся штаммов, а также постоянно обнаруживаемых новых изолятов. Поэтому, к сожалению, ПЦР-диагностика калицивируса дает много ложноотрицательных результатов.

Миф 2

Приоритетная значимость количественной ПЦР по сравнению с неколичественной

Количественная ПЦР является очень важным и мощным инструментом при мониторинге некоторых вирусных заболеваний. В диагностике человеческих вирусных заболеваний на настоящий момент валидировано несколько тест-систем для количественной оценки вирусной нагрузки вирусов гепатита В и С, а также вируса иммунодефицита человека. Это действительно важно для оценки лечения или поддерживающей терапии. Если говорить о животных, то количественная ПЦР также важна для оценки вирусной нагрузки у животного таких вирусов, как вирус иммунодефицита кошек и вирус лейкоза кошек. Однако доктор должен понимать, что количественная ПЦР возможна только в определенном материале, а именно в крови, поскольку отбор крови можно стандартизировать, плюс кровь является достаточно стабильной жидкостью организма. Количественная ПЦР на хламидиоз все же вызывает у меня некоторое недоумение. Не уверена, что так важно знать, например, количество хламидий, кроме того, это весьма затруднительно определить практически, поскольку невозможно универсально забрать несколько последовательных мазков. Врач не может быть уверен, что сегодня он забрал такое же количество конъюнктивального эпителия кошки, как и в прошлый раз. Мне кажется, что эффективность лечения хламидиоза у животного может быть вполне успешно оценена доктором визуально; при проведении ПЦР в реальном времени теоретически тоже достаточно хорошо видно, эффективно ли лечение, но тут возникает та же проблема, по которой результат количественной ПЦР может, мягко говоря, не соответствовать действительности – повторюсь – невозможность унифицированного забора. В общем, я бы не стала переоценивать значение количественной ПЦР в этих случаях, но если доктор все же решил, что он хочет действовать таким образом, тогда нельзя менять лабораторию в процессе мониторинга конкретного животного, поскольку универсальных валидированных тест-систем для количественной ПЦР в отечественной ветеринарии в настоящее время нет, и результаты, полученные в разных лабораториях, сравнить невозможно.

Миф 3

Значимость результата, полученного в «человеческой» лаборатории

Часто на форумах доктора из городов, в которых нет ветеринарных ПЦР-лабораторий, задают вопрос: как же все-таки провести диагностику на наличие возбудителя заболевания? К сожалению, бывают советы сдать анализ в «человеческую» лабораторию. И кто-то даже следует этим советам. Хочется еще раз повторить простую истину: большинство возбудителей у животных и человека все же различаются. В лаборатории, которая проводит исследования для людей, вам сделают анализ на хламидию, микоплазму, герпес человека. И еще, не дай бог, найдут все это в материале животного (такие случаи, к сожалению, нередки). На мой взгляд, если нет возможности провести исследование методом ПЦР в ветеринарной специализированной лаборатории, то лучше вообще не делать такого исследования, а проводить симптоматическое лечение.

Миф 4

Коммерческие лаборатории не работают с РНК

Для меня, скажу честно, это было откровением. Я слышала от многих людей, что лаборатория всегда и при всех обстоятельствах хочет только заработать, и для этого пойдет на любой обман. Вероятно, позиции прайсов об исследовании на разные РНК-содержащие вирусы также многими воспринимаются как обман. Хочется со всей ответственностью заявить, что конкретно наша лаборатория таким обманом не занимается, и мне кажется, что все остальные лаборатории тоже. Конечно, в силу многих факторов работа с РНК сложнее, чем с ДНК, но в настоящее время продаются прекрасные реагенты, значительно упрощающие жизнь при работе даже с такой нестабильной молекулой.

Миф 5

ПЦР может и должна быть дешевой

Нет, не может и не должна уж тем более. Для начала хотелось бы заметить, что постановка ПЦР представляет собой достаточно длительный и трудоемкий ручной процесс, требующий от человека, который этим занимается, высокой квалификации и понимания сложных механизмов. Но это лирика, естественно. Вторым немаловажным фактором является то, что реагенты для проведения ПЦР стоят дорого. Я не говорю о реагентике российского производства. К сожалению, ее качество такое, что, на мой взгляд, предпочтительнее и менее затратно получается пользоваться реагентами производства США и Европы. То есть я уверяю, что если хочется получать воспроизводимый адекватный результат и не иметь никаких осечек, то лучше не экономить. Исследование методом ПЦР в Англии, например, если перевести в рубли, стоит около 1500 рублей. А реагенты те же самые. Вероятно, там больше ценится труд специалиста, и есть понимание самого процесса. В нашей стране, к сожалению, многие врачи считают, что анализ в лаборатории полностью автоматизирован, а сотрудники только жмут кнопку. Работа мозга сотрудника лаборатории даже не рассматривается, нет осознания того, что не всегда все происходит по протоколу, и, чтобы опровергнуть или подтвердить диагноз доктора, люди выворачиваются наизнанку. Все стараются сдать анализ там, «где подешевле», не понимая, что качество при этом сильно теряется.

Миф 6

Лаборатория должна поставить диагноз

Справедливости ради стоит сказать, что такое бывает очень редко, но все же бывает. На мой взгляд, ответственность в постановке диагноза лежит целиком и полностью на враче. Лаборатория только помогает доктору подтвердить или опровергнуть его дифференциальные диагнозы. Ни один лабораторный метод не дает стопроцентной точности.

Миф 7

Если методом ПЦР не подтвердился ни один из дифференциальных диагнозов, значит, лаборатория плохая

Есть масса факторов, в силу которых можно получить ложноотрицательный или ложноположительный результат. Ошибиться могут все. И до 70% ошибок происходит в момент пробоотбора. У доктора в момент взятия материала на анализ, как правило, уже имеется мнение, чем болен пациент. И зачастую доктор абсолютно прав. Но если лаборатория выдает отрицательный результат, это не доказывает автоматически ее вину. Существуют универсальные правила забора материала, например, при подозрении на бактериальную инфекцию материал отбирают до введения антибиотиков. Если забор осуществили после двухнедельной антибиотикотерапии, то логично получить отрицательный результат, хотя у животного имелось именно то заболевание, которое предполагал доктор. Есть инфекции, адекватная диагностика которых требует временных и материальных затрат владельца. Например, возбудителя трихомоноза кошек можно не обнаружить в любой порции кала, для подтверждения диагноза требуется исследовать несколько образцов фекалий, собранных с интервалом в 8-12 часов. Часто владелец животного и врач считают это сложным. Да, они правы, но это не проблема лаборатории. При диагностике того же герпесвируса кошек нельзя отбирать материал после проведения флюоресцеинового теста, поскольку краситель, попавший в забранный материал, может заблокировать ПЦР. И это только несколько примеров среди огромного количества факторов, которые должны быть учтены врачом, желающим получить адекватный результат на свой запрос.

В заключение хотелось бы написать, что, к сожалению, у меня часто складывается впечатление некоего противостояния врачей и лаборатории, по крайней мере, в России. Врачи не доверяют лабораториям, лаборатории считают некомпетентными врачей, и т.д. Мне кажется, что такого противостояния быть не должно: лаборатория всегда должна помогать врачу, а для этого доктор должен делиться с ее сотрудниками полной информацией. Я могу точно сказать, что наша лаборатория старается помочь решить любую возникшую проблему, и мы всегда готовы обсудить какие-то непонятные моменты и произошедшие недоразумения.

Коронавирус широко распространен в популяции домашних кошек, поэтому ветеринарные врачи часто сталкиваются с тремя типами отношения хозяев зараженных коронавирусом зверей к своим питомцам:

2) при наличии симптомов заболевания и при положительных анализах на коронавирус одновременно люди (как правило опытные пользователи Интернета, старожилы кошачьих форумов) говорят «ай, фигня, это же всего-лишь безобидный коронавирус, зачем его лечить и ходить с этим к врачу, не обращайте внимание и оно само пройдёт»

3) лечить, лечить и ещё раз лечить! Многим тяжело принять то, что с некоторыми заболеваниями подавляющее большинство кошек прекрасно справляются самостоятельно. Есть болезнь - значит необходимо ее лечить, и пошло-поехало - уколы, таблетки, пересдача анализов раз в неделю…

Как бы грустно ни было это признавать, но и среди людей, связанных с кошками профессионально - ветеринарных врачей и заводчиков, можно нарваться на радикальные взгляды в сторону коронавируса.
Иногда приходится видеть рекомендации к эвтаназии животного, у которого аж коронавирус (как правило, усыпление пациента мотивировали тем, что коронавирус может мутировать в FIP - вирус инфекционного перитонита кошек),
или слышать от заводчиков «да этот коронавирус есть вообще во всех питомниках, поэтому мы на него не проверяем, попробуйте поищите питомник без коронавируса - не найдёте».

Все описанные выше крайности в отношении к коронавирусу у кошек - ошибочны и основаны на безграмотности в теме заболевания. Владельцы кошек не виноваты в этом, они не обязаны иметь образование ветеринарного врача и знать всё обо всех болезнях.
Но иногда отсутствие адекватной информации под рукой вовремя может привести к самым печальным последствиям - к серьёзному заболеванию или даже к гибели животного.
Коронавирус у кошек - это не приговор, не «страшное, неизлечимое, смертельное», но и не пустяк, о котором можно вообще забыть. Это инфекционная болезнь со своими особенностями течения, о которых необходимо знать, чтобы принимать грамотные действия своевременно и качественно заботиться о своём питомце.

Поэтому сегодня мы решили рассказать Вам о коронавирусе - просто.

ПАТОФИЗИОЛОГИЯ

Вирус проникает в организм через ротоглотку, достигает желудочно-кишечного тракта и вызывает воспалительный процесс слизистой оболочки тонкого отдела кишечника (живёт в клетках кишечного эпителия и разрушает их).
Иммунитет кошки работает над выведением вируса и большинство животных побеждают инфекцию самостоятельно. Процесс естественного выведения коронавируса из организма может занимать от нескольких недель до нескольких месяцев.
Если большое количество кошек живут скученно, то они могут перезаражать коронавирусом друг друга снова и снова.
Небольшой процент кошек могут остаться носителями коронавируса навсегда (13% инфицированных).

ПЕРЕДАЧА ВИРУСА

Коронавирус в большом количестве (миллиарды вирусных частиц на 1 грамм кала) выделяется с фекалиями инфицированных. Заражение происходит, когда кошки глотают или вдыхают вирус.
Заразность коронавируса очень высокая, для распространения достаточно небольшой частицы наполнителя из лотка, которым пользовалась выделяющая вирус кошка.

Кошачий коронавирус хорошо себя чувствует во внешней среде и может оставаться жизнеспособным на поверхностях в течение 7 недель.

По разным исследованиями от 60 до 80% всех кошек планеты заражены коронавирусом или когда-то контактировали с ним.

Риск передачи коронавируса через прикосновения рук, одежду или животных других видов невелик, только если руки/одежда/другое животное будут загрязнены непосредственно калом выделяющего вирус кота.

FIP - ВИРУСНЫЙ ПЕРИТОНИТ КОШЕК

«Кишечный» коронавирус кошек (FCoV), о котором идёт речь в статье, имеет привязанность к эпителиальным клеткам кишечника и может размножаться только в них.

Существует очень похожий вирус FIPV - вирус инфекционного перитонита кошек/ФИП, который не привязан ни к какому органу, с током крови распространяется по всему организму и поражает все системы органов.

Эти два вируса чрезвычайно близки по антигенному составу, и существует вероятность того, что ФИП - это мутационная форма коронавируса. Принято считать, что под воздействием стресс-факторов коронавирус может мутировать в ФИП - это не доказано наверняка, но на сегодняшний день является основной теорией.

Коронавирус обычно протекает достаточно легко и не является заболеванием, угрожающим жизни животного, в то время как ФИП - тяжёлое, 100% смертельное состояние.

Очень важно понимать, что хотя коронавирус и ФИП, вероятно, имеют одного и того же возбудителя, это принципиально разные, ни в коем случае не тождественные заболевания .
Кошка с положительным анализом на коронавирус может никогда не заболеть перитонитом, в то время как у кошки с инфекционным перитонитом может быть отрицательный анализ кала на коронавирус.

ФИП развивается менее чем у 10% кошек, зараженных кишечным коронавирусом.

Если ваше животное погибло из-за инфекционного перитонита, выждите не менее 7 недель прежде чем приносить в этот же дом нового питомца.

ПРОГНОЗ ПРИ КОНТАКТЕ С КОРОНАВИРУСОМ

При контакте кошки с коронавирусом существуют 4 варианта развития событий:

1) У животного разовьется ФИП (как было сказано выше, это происходит менее чем у 10% зараженных).

2) Кошка некоторое время будет выделять коронавирус и вырабатывать антитела к нему, затем прекратит выделять вирус, и титр антител снизится вплоть до нуля. Примерно в половине всех случаев заражения выделение вируса длится в пределах месяца, и только 5% кошек выделяют вирус более 9 месяцев.

3) Кошка становится носителем коронавируса пожизненно (13% всех инфицированных кошек). Такие кошки постоянно выделяют FCoV в фекалиях, оставаясь заразными непрерывно. Большинство пожизненных носителей остаются клинически здоровыми, однако у некоторых проявляется хроническая диарея.

4) Кошка устойчива к вирусу - представляется, что около 4% кошек из всей популяции абсолютно устойчивы к коронавирусной инфекции.

СИМПТОМЫ КОРОНАВИРУСА

Коронавирусная инфекция у кошек чаще всего протекает без каких-либо жалоб, либо проявляется умеренно выраженными симптомами, такими как

Мягкий или жидкий стул,
- плохой аппетит,
- температура.

Как правило, эти симптомы не вызывают серьезного ухудшения общего состояния и не требуют медикаментозного лечения, если речь не идет о присоединении вторичной инфекции или сопутствующих заболеваниях.

Нередко от владельцев домашних животных можно услышать заключения: «А у нас коронавирус протекал тяжело, с некупируемой рвотой, лихорадкой, облысением и ампутацией правой тазовой конечности» (утрированно). Чаще всего это означает, что у пациента был(и) ещё диагноз(ы), который(е) не установили, но успешно списали всё на случайно пришедший в анализах положительный коронавирус.

Очень важно понимать , что если у котёнка жидкий стул и плохой аппетит, а также положительный анализ на коронавирус, то это вовсе не значит, что коронавирус является причиной симптомов болезни, он может просто тоже быть у животного, заодно, в то время как зверь страдает от инородного тела, застрявшего в кишечнике, например (или от любого из ещё 150 дифференциальных (возможных) диагнозов с такими распространёнными симптомами, как сниженный аппетит и диарея).
Именно поэтому, даже если вы знаете, что у питомца коронавирусный энтерит, никогда нельзя списывать на него появившиеся симптомы, при их появлении обязательно необходимо обратиться в ветеринарную клинику для диагностики.

ДИАГНОСТИКА КОРОНАВИРУСА

Коронавирус выделяется со стулом, поэтому наиболее чувствителен тест на определение вируса в фекалиях.

Однократное исследование малоинформативно, так как кошка может выделять вирус время от времени, не выделяя его в течение коротких промежутков времени вообще.
ПЦР-тест должен быть частью серии исследований, лучше всего делать его в сочетании с иммунофлюоресцентными анализами на антитела (в клинике вы чаще всего услышите словосочетание «титр антител», тут всё просто - при заражении и какое-то время после организм выделяет антитела, чтобы победить инфекцию, и антитела не выделяются, если им не с чем бороться).

Существуют разные мнения насчет того, как достоверно установить факт избавления кошки от инфекции - как правило, для этого требуется выполнение 5 последовательных исследований фекалий методом ПЦР с интервалом в 4 недели, и получить все результаты негативными. Согласно шведскому институту вирусологии, кошка считается не выделяющей коронавирус, если будут отрицательными 4 исследования фекалий методом ПЦР, сданные один за одним с промежутком 7–10 дней.

Уменьшение титра антител до уровня <10 по результатам анализа серологическим методом также указывает на выведение вируса из организма, снижение титра антител всегда наблюдается уже после того, как кошка перестала выделять вирус.

Для того, чтобы установить, что кошка является пожизненным носителем коронавируса, результаты анализов кала на FCoV должны оставаться положительными в течение как минимум восьми месяцев.

ПРОФИЛАКТИКА КОРОНАВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ

Перед тем как подселять новых животных в группу кошек, свободную от коронавируса, новичков необходимо обследовать и не вводить в прайд серопозитивных животных (серопозитивные - это кошки, у которых организм вырабатывает антитела против коронавируса, вырабатывает - значит знаком с ним, значит может быть инфицированным).

Карантин в отдельном помещении с отдельным лотком должен составлять 12 недель, после чего проводится повторный анализ. Только кошки с нулевым титром антител должны быть допущены в питомники, свободные от коронавируса.

Инфекция FCoV может быть естественным образом выведена из питомника, где обитает менее 10 животных, в то время, как если в одном помещении контактируют более 10 животных, спонтанное естественное выведение вируса очень маловероятно, так как происходит постоянная перекрестная передача возбудителя от одной кошки к другой.
В таких группах кошек необходимо провести тестирование и изолировать кошек с котятами на 12 недель. Ранний отъем (до 4 недель) и удаление котят на 12 недель от серопозитивных матерей способствует искоренению инфекции.
Все кошки, дающие положительную реакцию, должны быть удалены.

Если кошки содержатся в доме, необходимо обеспечить индивидуальный лоток для каждой кошки, в идеале - в разных комнатах. Лотки должны содержаться в чистоте, необходимо избегать остатков высохших фекалий, которые становятся летучими. Предпочтительно использовать закрытые лотки-домики и непылящий комкующийся наполнитель, чтобы минимизовать распространение микрочастиц фекалий.
Миски с кормом должны стоять как можно дальше от лотков с наполнителем.

ВАКЦИНАЦИЯ ОТ КОРОНАВИРУСА

Попыток разработать эффективную и безопасную вакцину от ФИП было предпринято множество, однако большинство из них были неудачными.
На сегодняшний день на рынке представлена интраназальная вакцина (спрей, впрыскиваемый в ротоглотку) от коронавируса кошек Primucell, Pfizer.

Вакцина изготовлена на основе температурно-зависимого штамма коронавируса, этот штамм способен к размножению только в ротоглотке, где более низкая температура, поэтому он вызывает местный иммунитет в воротах вхождения вируса, но продуцирует очень маленькое количество системных антител.

Данная вакцина эффективна против коронавируса и удовлетворяет требованиям безопасности, однако не получено убедительных доказательств в пользу ее эффективности от инфекционного перитонита, вызываемого коронавирусом. Кроме того, к моменту достижения возраста 16 недель (рекомендуемый срок первичной вакцинации) большинство кошек группы риска уже имели контакт с коронавирусом, а значит вакцинация не имеет смысла.

Кишечный коронавирус не является тяжелым заболеванием, поэтому вакцинация от него применяется редко, эффективность же от ФИП требует дальнейших исследований.
На 2014 год данная вакцина не включена в список рекомендуемых комитетом по вакцинации Всемирной ассоциации врачей по мелким домашним животным (WSAVA).

ЭЛИМИНАЦИЯ ВИРУСА (ВЫВЕДЕНИЕ ВИРУСА ИЗ ОРГАНИЗМА)

Вопросом скорейшим выздоровлением от коронавируса озабочены многие владельцы кошек и питомников. В интернете можно встретить самые фантастические многоступенчатые схемы выведения вируса, содержащие рекомендации по диете, курсам иммуномодуляторов из нескольких препаратов, витаминов, антиоксидантов, гомеопатических средств и т. п.
Как правило, авторы этих схем имеют отдаленное отношение к ветеринарии и еще более отдаленное - к принципам доказательной медицины.

Если речь не идет о бесконтрольном использовании набора иммуностимулирующих препаратов, любые действия владельца, направленные на «выздоровление» кошки не нанесут вреда животному, но едва ли повлияют на вирус.
Необходимо понимать, что рано или поздно абсолютное большинство кошек самостоятельно избавляются от вируса (в противном случае, смертность была бы очень высокой).

Важно понимать :
вероятно, практически безобидный кишечный коронавирус мутирует в смертельный неизлечимый ФИП при стрессе. Следовательно, чем меньше стресса, чем меньше населенность кошачьей популяции - тем больше шансов что при инфицированности коронавирусом ФИП не выработается.
Чем больше владельцы начинают экспериментировать, «лечить» и «выводить» вирус, особенно если это связано с принудительным введением каких-либо препаратов (обкалыванием кота иммуномодуляторами и запихиванием насильно в пасть горсти таблеток ежедневно длительное время) - тем больше стресса они вызывают у животного и тем самым сами повышают вероятность развития ФИП у своего животного!

Для кошек - носителей коронавируса наибольшая вероятность развития ФИП существует в возрасте до года (по некоторым данным до 3-х лет), поэтому если у вашей кошки приходит положительный анализ на коронавирус в более позднем возрасте, маловероятно, что у нее возникнет ФИП.

Меры, которые могут способствовать выведению коронавируса из организма или по крайней мере бессимптомному перенесению заболевания:

Хороший уход, поддержание высокого уровня гигиены;

Полноценное сбалансированное кормление высокобелковым рационом.

Существует мнение, что закисление среды желудочно-кишечного тракта, что достигается, прежде всего кормлением сырыми мясом/рыбой, может способствовать победе над коронавирусом, однако это не подтверждается никакими объемными исследованиями, кроме того, кормление сырым рационом закономерно повышает риск получения гельминтозов, токсоплазмоза и т. д.;

Антиоксиданты, такие как витамины A, C и E и цинк, возможно, оказывают противовирусное и/или иммуностимулирующее действие.

Все витаминные препараты можно применять только под контролем ветеринарного врача.
Нет необходимости продолжать использовать антиоксиданты дольше, чем несколько месяцев после того, как у кошки был риск заражения коронавирусом FCoV, более того, это может быть вредно.

ОСОБЫЙ УХОД

Так как очень вероятно, что мутацию коронавируса в FIP провоцируют различные стресс-факторы, то после рекомендации ветеринарного врача избегать стрессовых ситуаций для животного, многие владельцы начинают содержать зверя как инвалида, который в любой момент может умереть - не дают ему препараты от блох и глистов, не вакцинируют животное, отказываются от кастрации и от других операций, даже при наличии показаний, не посещают планово ветеринарного врача.

При отсутствии образования ветеринарного врача поведенческой медицины, для большинства владельцев «стресс» - вообще очень субъективное понятие, и полностью оградить своего питомца от стрессов мы не можем никогда, потому что для разных особей разные ситуации волнительны: для одной кошки стресс - прогулка вне дома, для другой кошки стресс - отсутствие прогулки вне дома, для одного животного не будет стрессом работающий рядом пылесос, другое животное страдает даже если в миске закончилась вода.

Что касается вакцинации и хирургических операций для животных с положительным анализом на коронавирус:
вакцинируют и планово оперируют только клинически здоровых животных, то есть, если у животного нет внешних признаков заболевания (повышенной температуры, рвоты, диареи, сниженного аппетита, истощения, обезвоживания, выделений из разных мест и т. д.) - его обязательно вакцинируют и его можно оперировать, даже если оно является носителем коронавируса.
Нет никаких данных за то, что данные процедуры повлияют на течение заболевания самим коронавирусом или его мутации в ФИП.

Если у животного с коронавирусным энтеритом есть симптомы заболеваний, то его лечат симптоматически и потом вакцинируют/при необходимости оперируют.

Если животное не страдает от неутолимого полового влечения и кастрация планируется планово, а не как избавление от мучений, то имеет смысл подождать. Скорее всего коронавирус в течение нескольких месяцев естественным путем покинет организм животного.

На этом всё. О вирусном перитоните кошек (ФИП) можно рассказать больше, но в рамках отдельной статьи, так как это два разных заболевания.

Если у вас остались вопросы, не стесняйтесь задавать их в комментариях к статье.

Инфекционный перитонит кошек – системная вирусная болезнь (Coronavirus) , которая поражает многие ткани организма. Определены две формы болезни: влажная и сухая. При влажной форме, воспалительная жидкость аккумулируется в абдоминальной полости. При сухой форме, вирус атакует различные органы, такие как почки и селезенка. Нет лечения для данной болезни и почти всегда исход фатальный. ИПК наиболее часто диагностируется у котят и взрослых кошек до 3х лет. Кошки в питомниках или в домах с несколькими животными имеют наивысший риск развития болезни.

Дополнительная информация
ИПК системная вирусная болезнь, характеризующаяся скрытым началом, периодической неконтролируемой лихорадкой, пиогранулематозной реакцией, аккумулирование экссудата в полостях тела, высокой смертностью.

Патофизиология
Вирус ИПК реплицируется локально в эпителиальных клетках респираторного тракта или орофарингса. Вирусные тела начинают вырабатываться, и вирус поглощается макрофагами. Вирус транспортируется макрофагами/моноцитами по организму, локализуясь в стенках различных вен и периваскулярного пространства. Локальная периваскулярная репликация вируса и последующая пиогранулематозная реакция со стороны тканей образует характерную картину поражения при ИПК.

Поражаемые системы

• Мультисистемная – пиогранулематозные или гранулематозные повреждения происходит в сальнике, на серозных оболочках органов брюшной полости, таких как печень, почки, кишечник, в абдоминальных лимфатических узлах, и подслизистом слое кишечника.
• Респираторная – поражения на поверхности легких, плевральный выпот при влажной форме ИПК.
• Нервная – васкулярные поражения проявляются на всем протяжении ЦНС, особенно, на оболочках
• Офтальмологическая – повреждения могут проявляться увеитом и хореоретинитом.

Генетическая предрасположенность
Нет.

Распространенность
Распространенность антител против коронавируса кошек (вируса ИПК, КВК, FCoV) высокая в большинстве популяций, особенно там, где много кошек содержится совместно. Инциденты клинического проявления болезни низки в большинстве популяций, особенно у кошек, которые содержаться одни. Из-за трудности в диагностике, контроле и профилактики вспышка ИПК в гостиницах для кошек может стать катастрофой.

Признаки инфекционного,вирусного перитонита кошек (ИПК, ВИПК, FIP)

Домашние кошки и экзотические кошки предрасположены к инфекции ВИПК.

Породная предрасположенность
Некоторые семьи или линии кошек проявляют большую предрасположенность к развитию клинической формы болезни после инфицирования ВИПК. Среди экзотических кошек, гепарды особенно предрасположены к развитию фатального ИПК.

Средний возраст и диапазон
Высокая распространенность ВИПК проявляется у котят в 3 мес. до 3 лет. Распространенность снижается после достижения кошкой 3 лет.

Половая предрасположенность
Нет

Анамнез
Общие комментарии
Широкий диапазон признаков может проявиться в зависимости от вирулентности и патогенности штамма вируса вовлеченного в процесс, эффективности иммунной системы хозяина и поражаемых систем. Различают две классические формы болезни, влажная, с выпотом экссудатов в полости тела и сухая, которая поражает различные органы.
Анамнез

1. Имеется скрытое начало
2. Постепенное истощение снижение аппетита
3. Остановка в росте
4. Постепенное увеличение объема живота, развитие водянки, асцита, пузатый вид животного
5. Постоянная лихорадка без ответа на антибиотики

Результаты физикального обследования

• Депрессия, низкорослость
• Плохое общее состояние – потеря веса и плохое состояние шерсти
• Абдоминальные и плевральные выпоты
• Пальпация может выявить абдоминальные массы (гранулемы или пиогранулемы) на сальнике, на поверхности внутренних органов, особенно почек, и на кишечных стенках. Мезентеральные лимфатические узлы могут быть увеличены.
• Глаза: , изменение цвета радужки, неправильная форма зрачка.
• Неврологические признаки могут включать различные варианты.

Причины
ВИПК вызывается одним из двух типов коронавируса кошачьих. Большинство инфекций, возможно 85%,вызываются типом 1 вируса (FCoV-1), остальные типом 2 (FCoV-2). Очень важно проводить различие между двумя биотипами вируса, менее вирулентные и авирулентные кишечные виды вируса (кишечный коронавирус кошек или КККВ) и вирулентными видами, которые приводят к возникновению ВИПК. В действительности, ВВВК и в ВИПК могут становиться как типом 1 так и типом 2. В каждом типе есть спектр вирулентности из авирулентных вирусов, которые образуют асимптоматические инфекции и фатальное поражение ВИПК.

Факторы риска

• Вступление FCoV-антителпозитивныной кошки в популяцию FCoV-антителнегативных кошек (незащищенных антителами против ВИПК)
• Кошки, содержащиеся группами

Диагностика ВИПК

Влажная форма ВИПК может быть легко выявлена клиническим путем, тогда как сухую форму сложно точно диагностировать. Нет ни одного лабораторного теста для диагностики ВИПК, потому что болезнь вариабельно от случая к случаю.

Дифференциальный диагноз

• Лихорадка неизвестного происхождения. Этот диагноз можно поставить когда отвергнуты все другие возможные причины гипертермии.
• Болезни сердца вызывающие плевральный выпот. Это выпот буде иметь низкую относительную плотность и количество клеток в сравнении с высокой плотностью и огромным содержанием клеток при ВИПК выпоте.
• Повреждения при лимфоме, особенно почек, могут быть сходными с ВИПК при пальпации. Опухоли ЦНС могут проявлять признаки подобные тем, что и при ВИПК. Большинство кошек с позитивным тестом на ВИПК-антиген. У кошек с негативным результатом теста, биопсия мест поражения (при возможности) должны подвергаться гистопатологическому или иммунохимическому анализу на ВИПК-антиген.
• Респираторные болезни, вызываемые калицивирусом кошек и герпесвирусом кошек, хламидиями или различными бактериями.
• Панстеатит (болезнь желтого жира). Боль при пальпации живота, и диета только из рыбы.
• Панлейкопения, вызывающая энтерит. Количество лейкоцитов должно быть низким.
  Диагноз
• Это заболевание подозревается при отсутствии ответа лихорадки на введение антибиотиков, наличию экссудатов в грудной и перитонеальной полостях без явных инфекционных агентов, гиперглобулинемии и повышенным содержанием белка в выпоте при влажной форме.
• Сердечная недостаточность, лимфосаркома и разрыв лимфатических протоков и т.п. болезни с признаками выпота в грудную и брюшную полости должны быть внимательно учтены и проверены, как и лейкемия кошек, вирусный иммунодефицит кошек и панлейкопения кошек.
• По различным причинам изоляция вируса не практична.
• Серологические процедуры: некоторые диагностические лаборатории не могут проводить тесты на ВИПК из-за сложности интерпретации результатов. ВИПК позитивный результат иммунофлуорересцентного анализа (ИФА) говорит лишь только о том, что животное имело контакт с вирусом, не подтверждая наличия вируса. Однако, существует насколько свидетельств что многие серологически позитивные кошки избавились от коронавируса возможно в респираторном или желудочно-кишечном тракте. Положительные тесты с использованием ИФА или ELISA не дают гарантированного диагноза на ВИПК.
• Позитивный результат теста ИФА на ВИПК (титр 1:50 до 1:6000) вместе с клиническими признаками ВИПК говорит о верном проявлении ВИПК. Хотя и необычно, но некоторые кошки с проявлением признаков ВИПК имеют отрицательный результат на серологическое исследование.

ИФА (иммуноферментный анализ)предпочитается многими диагностическими лабораториями, чем ELISA.

• Диагностические наборы для ИФА и ELISA диагностики доступны для использования на коронавирус кошек, но результаты необходимо интерпретировать с осторожностью.
• Общий белок, определяемый электрофорезом, заметно повышен.
• Позитивный результат окрашивания образцов (из легких, печени, почек, лимфатических узлов брыжейки и плевры) специфическими флуоресцирующими антителами на ВИПК считается окончательным диагнозом. Кишечный коронавирус перекрестно реагирует на тест к ВИПК.
• При жизни у животных в крови можно обнаружить тяжелую анемию, нейтрофилию и лейкопению.
• Так же коммерчески доступно ПРЦ исследование для оказания помощи в идентификации вируса в различных тканях.

Анализы крови и мочи

• Кошки с ВИПК имеют тенденцию к развитию лейкопении на ранней стадии инфекции, но позднее развивается лейкоцитоз с нейтрофилией и лимфопенией.
• Может выявляться анемия различной степени тяжести – от средней до тяжелой.
• Обычно заметно повышение уровня общего плазменного глобулина.
• Часто присутствует и гипербилирубиурия.

Лабораторные тесты

• Тест на сывороточные антитела определяют антитела против коронавирусов кошек. Позитивный результат не является диагностическим, и предпочтительнее показывает предыдущую инфекцию ВИПК. Корреляция между верхним значением титра и потенциального подтверждения ВИПК не велико.
• ПЦР (полимеразная цепная реакция) позволяет определить вирусный антиген. Точность позитивного теста коррелирует с клиническим проявлением болезни.
• Иммуногистохимическое исследование (иммунопероксидазой) доступно для определения ВИПК антигена в определенных клетках в гистопатологических образцах кошек при посмертном исследовании с фатальной формой болезни и образцах биопсии. Это тест является прекрасным для подтверждения ВИПК.

Визуальные методы диагностики обычно не требуются, но могут помочь в обнаружении абдоминально и плеврального выпота, а также пиогранулематозных повреждений.
Жидкость при влажной форме ВИПК также может обнаруживаться и в брюшной полости (асцит).
УЗИ дает дополнительную информацию, которую нельзя получить при помощи рентгенографии. В данном случае, увеличенные лимфатические узлы в центре кишечника.

Рентгенограмма: 1 . Диффузное затемнение в нижней части грудной клетки из-за плеврального выпота, из-за чего границы сердца 2 не видны, а легкие 4 сдвинуты к позвоночнику и мало вентилируются, 3 – трахея, 5 – печень, 6 – желудок, 7 – кишечник

Другие диагностические процедуры

• Жидкость, полученная из грудной и брюшной полостей, бледного или соломенного цвета, тягучая, часто с вкраплениями фибрина, а после отстаивания в ней оседают сгустки. Специфическая плотность такой жидкости обычно высокая (1.030-1.040).
• Лапароскопия может быть полезной для обнаружения специфических повреждений в брюшной полости и получения образцов тканей для гистопатологического и иммунохимического подтверждения.
• Диагностическая лапаротомия может выявить истину, если есть трудность в постановке диагноза и если лапароскопия недоступна.

Внешние и гистопатологические изменения

Мониторинг за пациентом
У кошки с ВИПК необходимо контролировать скопление экссудата в плевральной полости.

Профилактика

• Имеется в продаже MLV интраназальная вакцина против ВИПК. Однако, эффективность дано вакцины низкая, следовательно на ней нельзя целиком полагаться в вопросе контроля ВИПК.
• Главный способ передачи ВИПК – от кошек асимптоматических вирусоносителей котятам в возрасте 5-7 недель, когда колостральный иммунитет начнет ослабевать. Следовательно, ранний отъем котят в возрасте 4-5 недель с выращиванием котят изолированных от прямого контакта с другими кошками включая матерей, прервет цикл передачи вируса от матери к потомству.
• Обычная дезинфекция мест обитания кошки и средств по уходу и кормлению быстро инактивирует вирус и уменьшает риск передачи от кошки к кошке.
• Только FCoV- антител негативные кошки должны вводиться в питомник или колонию кошек как гарантия свободы организма от вируса. Вакцинация может делать кошек антител-позитивными и может затруднить контроль вируса в популяции.

Возможные осложнения
При плевральном выпоте необходим торакоцентез, как средство лечения.

Ожидаемый курс и прогноз
ВИПК может запустить проявление клинических признаков в течение нескольких дней или нескольких месяцев. Прогноз смертельный после проявления типичных признаков ВИПК инфекции, достигая 100% смертности.

Клинические признаки, типично проявляющиеся при данной болезни.

• Снижения вольтажа на ЭКГ, затухание комплексов и низкая амплитуда.
• Приглушение сердечных тонов
• Тахикардия, учащение пульса
• Растяжение брюшной полости
• Анорексия, сокращение или потеря аппетита
• Асцит
• Снижение объема фекалий, запор, отсутствие фекалий
• Диарея
• Дисфагия
• Гепатоспленомегалия, спленомегалия, гепатомегалия
• Полифагия, избыточный аппетит
• Аномальное проприорецептивное позиционирование
• Атаксия, дискоординация, падание
• Цианоз
• Дегидратация
• Дисметрия, гиперметрия, гипометрия
• Непереносимость физической нагрузки
• Лихорадка
• Хромота передних конечностей
• Генерализованная диагностика
• Генерализованная слабость
• Слабость в области головы, шеи, парез, паралич
• Гемипарез
• Хромота задних конечностей
• Массы в брюшной полости
• Недостаток роста
• Лимфаденопатия
• Опистотонус
• Бледность кожи и слизистых оболочек
• Полидипсия
• Припухлость в области препуция, семенников, пениса, мошонки
• Тетрапарез, слабость, паралич 4х конечностей
• Дрожь, тремор, фасцикуляция
• Потеря веса
• Аномальное поведение, агрессия, изменение привычек
• Аномальные рефлексы передних конечностей, усиление или уменьшение
• Аномальные рефлексы задних конечностей, усиление или уменьшение
• Кружение
• Дезориентация, потеря памяти
• Тупоумие, депрессия, летаргия
• Делириум, бред, мания, возбуждение
• Гипоэстезия передних конечностей, анестезия
• Наклон головы

• Гиперестезия, гиперактивность
• Гипертония мышц, миотония
• Гипотония мышц
• Пропульсия, бесцельное брожение
• Судороги или обмороки, конвульсии, коллапс
• Тремор
• Аномальный рефлекс зрачка на свет
• Аномальная рефлективность сетчатки
• Аномальный размер сосудов сетчатки
• Анизокория
• Блефароспазм
• Слепота
• Хемоз, отек конъюнктивы, роговицы
• Аномальная васкуляризация конъюнктивы и роговицы
• Краснота конъюнктивы, роговицы
• Отек роговицы
• Паннус
• Гифема, «черный глаз»
• Гипопион
• Слезотечение
• Миоз, сокращение зрачка
• Мидриаз, расширение зрачка
• Нистагм
• Помутнение стекловидного тела
• Атрофия зрительного нерва, сокращение размеров зрительного нерва
• Гнойные истечения из глаз
• Отслоение клетчатки
• Складки и бугры на сетчатки
• Кровоизлияния сетчатки
• Синехии
• Боль спины
• Боль шеи
• Боль от внешнего давления на брюшную полость
• Аномальный размер семенников
• Кашель
• Притухание легочных звуков
• Диспноэ
• Тахипноэ
• Слизистые носовые истечения, серозные, водянистые
• Гнойные носовые истечения
• Грубость и неопрятность шерсти
• Глюкозурия
• Кетонурия
• Полиурия

Лечение

В зависимости от тяжести протекания болезни животное должно проходить лечение либо стационарно или амбулаторно, желания и возможности владельцев обеспечить хорошее поддерживающее лечение.

Активность
Активность животного необходимо сократить для уменьшения распространения вируса к другим кошкам.

Диета
Анорексия и потеря веса – лавные проблемы при ВИПК. Любая диета, которая побудит животное к приему пищи, приветствуется.

Обучение владельцев
Обсудите различные аспекты ВИПК. Включая фатальный прогноз при окончальтеной постановке диагноза.

Хирургические аспекты
Нет

Лекарственные препараты

• Нет препаратов для эффективного лечение ВИПК. Кошки с генерализованной инфекцией ВИПК почти всегда погибают.
• Иммуносупрессивные препараты, такие как преднизолон и циклофосфамид применяются с ограниченным успехом. Кортикостероиды как субконъюнктивальные инъекции эффективны только при офтальмологическом проявлении болезни.
• Интерфероны, хотя и эффективны in vitro, имеют ограниченный успех в лечении ВИПК. Рекомбинантный интерферон по оценкам имел некоторый успех в лечении ВИПК в Японии.
• Антибиотики не эффективны, поскольку вторичные бактериальные инфекции не являются частью клинического проявления болезни.

Противопоказания
Нет

Предостережения
Нет

Возможные взаимодействия
Нет

Альтернативные препараты
Нет эффективных противовирусных лекарств против ВИПК.

Прогноз
ВИПК проходит клиническое проявление в течение нескольких дней до нескольких месяцев. Прогноз смертельный при проявлении характерных клинических признаков, смертность 100%.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) - метод молекулярной диагностики, ставший для многих инфекций «золотым стандартом», проверен временем и тщательно апробирован клинически. Высокая чувствительность и специфичность метода позволяют гарантированно обнаруживать единичные возбудители в биологическом материале на основе их генетической информации. Аналитическая чувствительность ПЦР для большинства вирусов и бактерий составляет 1000 микроорганизмов в 1 мл пробы. Специфичность ПЦР для вирусных, хламидийных, микоплазменных и большинства других бактериальных инфекций достигает 100%.

Метод ПЦР был разработан сравнительно недавно, но к настоящему времени успел занять передовые позиции как в медицинской, так и в ветеринарной лабораторной диагностике инфекционных и инвазионных заболеваний. Основные принципы ПЦР открыл в 1983 году американский химик Кэри Б. Мюллис, за что и был удостоен Нобелевской премии.

ПЦР-анализ состоит из нескольких этапов. Первый этап - пробоподготовка - заключается в обработке исследуемого материала (приготовление суспензии, центрифугирование). На втором этапе проводится выделение наследственного материала - ДНК или РНК - из клеток. При этом после лизиса клеток и разрушения комплекса «ДНК-белок» производится осаждение ДНК или РНК на сорбенте с последующим переходом их в элюирующий буфер. На третьем этапе проводится амплификация, то есть умножение количества специфических участков ДНК. Для этого используются тест-системы, в состав которых входят праймеры - олигонуклеотиды, которые являются специфическими для каждого возбудителя. К разлитой в микропробирки ПЦР-смеси добавляют образцы и контроли, которые помещают в амплификатор или термоциклер - программируемый термостат с высокой скоростью и точностью задаваемой температуры. Процесс амплификации заключает в себе три стадии: денатурация, отжиг и элонгация. При определении в клинических образцах РНК-содержащих вирусов амплификации предшествует стадия обратной транскрипции, при которой РНК переводят в форму ДНК с использованием фермента обратной транскриптазы, или ревертазы. Четвертый этап ПЦР-диагностики заключается в проведении электрофоретической детекции продуктов ПЦР - ампликонов. При этом продукты ПЦР помещают в лунки агарозного геля и подвергают действию постоянного электрического тока, в результате чего отрицательно заряженная молекула ДНК движется к положительному электроду. В состав геля входит бромид этидия, который, образуя устойчивый комплекс с ДНК, делает эти полосы хорошо заметными при просмотре под ультрафиолетовым облучением (рис. 1).

Рис. 1. Стадии ПЦР

Следует отметить, что для получения достоверного результата ПЦР-анализа необходимым условием является соблюдение правил отбора, хранения и транспортировки клинического материала. Несмотря на то, что ПЦР является очень чувствительным методом, желательно наличие определенного количества возбудителя в пробе.

Взятие материала для ПЦР-исследования следует проводить в одноразовых неталькованных перчатках (так как тальк угнетает ПЦР). При взятии соскобов и смывов следует пользоваться одноразовыми стерильными зондами с повышенной адсорбцией (имеющими на конце щеточку), так как они отбирают оптимальное количество материала.

Соскобы и смывы со слизистых оболочек носа, ротовой полости, влагалища, конъюнктивы отбирают в одноразовые пластиковые микропробирки - эппендорфы - объемом 1,5 мл, в которые разлито по 0,5 мл стерильного физиологического раствора. Желательно не использовать зонды с ватными наконечниками. Следует также избегать отламывания кончика зонда в пробирку с физиологическим раствором, так как это затрудняет дальнейшую обработку и повышает риск перекрестной контаминации проб. Для получения необходимого количества материала достаточно вращать зонд в пробирке в течение 1-2 минут, избегая разбрызгивания жидкости. Проба должна быть мутной на вид, а при отстаивании в ней должен образовываться небольшой осадок.

Забор крови проводят одноразовой иглой в одноразовый шприц или в стеклянную пробирку без антикоагулянта. При заборе в шприц, кровь из него аккуратно (без образования пены) переносят в одноразовую стеклянную пробирку. Возможно использование вакуумных систем («Vacuette») для забора крови. Для исследования можно предоставить сыворотку крови: пробирки с кровью отстаивают при комнатной температуре в течение 30 минут до полного образования сгустка, затем центрифугируют при 3 тыс. об/мин в течение 10 минут и переносят в количестве не менее 1 мл в стерильные эппендорфы объемом 1,5 мл.

Сперму отбирают в стерильные одноразовые пробирки или флаконы.

Моча. Отбирают первую порцию утренней мочи в количестве не менее 20-40 мл в стерильный сухой флакон или пробирку.

Фекалии. Отбирают пробы массой 1-3 грамма из предварительно продезинфицированного и вымытого лотка, одноразовыми лопаточками переносят в стерильный флакон.

Кусочки пораженных органов от павших животных отбирают в стерильные одноразовые контейнеры или в чистые стеклянные или пластиковые емкости.

Следует строго соблюдать температурные режимы хранения и транспортирования отобранного материала. Транспортирование осуществляют в термоконтейнере с охлаждающими элементами или в термосе со льдом. При хранении материала более суток его необходимо заморозить при Т минус 20°С.

Наиболее часто встречающимися заболеваниями у кошек и собак являются конъюнктивит, ринотрахеит, а также энтерит. Для того чтобы выяснить этиологию заболевания, требуется провести качественную лабораторную диагностику.

Причиной коньюнктивитов или инфекций верхнего респираторного тракта у кошек может быть инфицирование следующими микроорганизмами: герпесвирус типа 1 (FHV1), калицивирус кошек, Chlamediapcittaci. Mycoplasma felis, Bordetella bronchiseptica, Feline reovirus, Staphylococ-cuc aureus, Brohaemolytic streptococcic и Salmonella tephimurium.

Наиболее частой причиной, по данным различных авторов и методов исследования, являются герпес-вирус типа FHY1 (от 10% до 34%) и калицивирус кошек (от 20% до 53%). Chlamydia pcittaci (от 10% до 35%).

Герпесвирусная инфекция , ассоциирована абортами, высокой смертностью новорожденных (инфицирование почти 60% случаев) с признаками интерстициальной пневмонии.
Калицивирус - тяжело протекает у котят, в то же время 25-80% переболевших взрослых животных становятся носителями и являются источником заражения, передавая вирус через слюну.

Панлейкопения - контагиозное вирусное заболевание кошек, характеризующееся резким падением уровня лейкоцитов, гастроэнтеритом, ринитами с конъюнктивитами, высокой смертностью (30-90 % заболевших котят).

Настоящим бичом для питомников является инфекционный перитонит кошек - тяжелое заболевание, возбудителем которого является РНК-содержащий высокопатогенный вирус. Вирус реплицируется в миндалинах и энтероцитах тонкого кишечника, рассеиваясь по организму через макрофаги и моноциты. Коронавирусы с низкой вирулентностью вызывают энтериты средней тяжести, чаще всего у котят после отъема от матери. Высоковирулентный коронавирус может привести к развитию сухого или выпотного перитонита. Перитонит часто сопровождается почечной недостаточностью, печеночными и неврологическими симптомами.

При инфицировании аденовирусами обоих типов и вирусом чумы плотоядных у собак проявляется общий комплекс симптомов: лихорадка, конъюнктивиты и ринотрахеиты, расстройство желудочно-кишечного тракта, поражение нервной системы.

При чуме плотоядных клинические признаки могут включать серозно-слизистые назальные и конъюнктивальные выделения, кашель, одышку, пневмонию, рвоту и понос, а также лихорадку и гиперкератоз.

Аденовирус плотоядных . Возбудитель - ДНК-содержащий аденовирус плотоядных первого типа (вызывает инфекционный гепатит плотоядных) и второго типа (вызывает аденовироз собак). Наблюдаются лихорадка, апатия, анорексия, жажда, рвота и понос, болезненность брюшной стенки при пальпации. Иногда развиваются конъюнктивит, кератит, светобоязнь. Могут быть точечные кровоизлияния на слизистой оболочке и коже. Редко наблюдаются неврологические нарушения.

Все перечисленные заболевания имеют высокий индекс контагиозности и ассоциированы с высокой смертностью среди щенков, от парвовирусного энтерита погибает 10-50% заболевших щенков, при инфицировании не вакцинированных щенков вирусом чумы плотоядных смертность доходит до 100%.

Токсоплазмоз . Возбудитель - простейшее Toxoplasma gondii. Размножение возбудителя происходит у кошек на стенках кишечника. С калом они выделяют во внешнюю среду ооцисты.

Тканевые цисты могут вызывать анорексию, угнетение, кератиты, желтуху, рвоту, понос и неврологические симптомы в зависимости от пораженных органов. У собак клинические симптомы зависят от пораженных органов: могут наблюдаться неврологические нарушения (тремор, атаксия, паралич) или токсоплазмозный миозит (нарушение походки, атрофия мышц, ригидность), а также миокардит и гепатит.

Хламидиоз и орнитоз . Возбудители у кошек - Chlamydophila felts, у собак - Chlamydophila abortus, Ch. pecorum, у тех и у других заболевание может вызывать Ch. psittaci. У птиц - Ch. psittaci.
У кошек заболевание проявляется в основном в форме гнойных и негнойных конъюнктивитов и кератитов, также могут наблюдаться ринит, пневмония, вагинит, аборты и бесплодие. У котят встречается неонатальныи хламидиозный конъюнктивит. У собак симптомы разнообразны и проявляются воспалительными заболеваниями конъюнктивы, половых органов, гастритами, артритами, абортами и бесплодием. Есть данные о роли хламидий в патогенезе атеросклероза у собак.

Микоплазмоз . Возбудители - микроорганизмы рода Mycoplasma. Протекает с признаками бронхопневмонии, кератоконъюктевитов и кератитов.

Вирусный иммунодефицит кошек. Иммунодефицит кошек - тяжелое заболевание, вызываемое вирусом из семейства Retrovoridae, рода Lentivirus. Вирус поражает иммунную и нервную системы. Обладает тропизмом к Т-лимфоцитам. В результате иммунодепрессии организм становится беззащитным против бактерий, грибов, вирусов и погибает от вторичной инфекции.
Клинические признаки развиваются медленно, и заболевание чаще регистрируется среди кошек 6-10 лет.

Встречаются у домашних животных и такие заболевания как: лептоспироз собак, листериоз кошек и собак, иерсиниоз щенков, бруцеллез, ротовирусный энтерит, бешенство.

Правильность постановки ПЦР-анализа и качественное выделение инфекции зависит, в первую очередь, от правильности взятия материала, во-вторых, от соблюдения температурного режима хранения и транспортирования проб. Поступившая в лабораторию проба регистрируется, проходит все стадии ПЦР, подвергается электрофоретической детекции с последующей выдачей конечного результата.

Таким образом, высокая чувствительность и специфичность ПЦР-метода позволяет гарантированно обнаруживать единичных возбудителей в биологическом материале за короткий промежуток времени, что позволяет поставить точный диагноз, назначить адекватное лечение и разработать профилактические мероприятия.

И.М. Донник, член-корреспондент РАСХН, д.б.н., профессор, Н.А. Пелевина, м.н.с, О.Г. Бодрова, м.н.с,
ГНУ Уральский государственный научно-исследовательский ветеринарный нститут РАСХН